Taq Talk第二十一期|如何优化SYBR Green qPCR检测
2023-02-06 10:16:00 赛默飞世尔科技生命科学产品
在上一期Taq Talk中，我们了解了SYBR Green熔解曲线的相关知识。在本周第二十一期课程中，我们来学习SYBR Green检测的优化方法。
SYBR Green检测优化的三个步骤
1
控制逆转录偏差
逆转录是qRT-PCR反应中最可变的部分。第一链合成反应可使用基因型、oligo(dT) 或随机引物，引物选择对于RT效率和一致性的影响较大，进而影响数据的准确度。
2
优化检测引物
引物的设计在SYBR Green qPCR检测中至关重要，直接关系到反应的灵敏度、特异性和准确性。
3
评估反应效率
评估反应效率的最佳方法是生成标准曲线。通过构建连续稀释的样本核酸，并进行实时荧光定量PCR，生成标准曲线。然后以起始核酸量为X轴，以Ct为 Y轴，绘制结果曲线。用于生成标准曲线的样本 (尽可能接近) 应与将用于实验的样本匹配 (即相同的总RNA或DNA样本)。标准曲线分析的稀释范围或动态范围应涵盖实验样本预期的浓度范围。曲线的斜率可用于测定反应效率，大多数科学家认为反应效率应在90%至110%之间。
更多对SYBR Green检测优化的讲解，请点击观看Byron带来的Taqtalk讲解。
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