2023-02-06 10:30:16, ABI 赛默飞世尔科技生命科学产品
在首期Taq Talk课程中,我们学习了实时PCR最常用的术语和缩写,在本周的第二期课程中,我们一起来了解实时PCR反应的三个阶段及其重要性。
在实时荧光PCR中,每一次PCR循环后,都由系统检测一次荧光,形成一个荧光信号数据点,在整个PCR循环结束后,所有的荧光信号数据点连接到一起形成的拟合曲线称为荧光扩增曲线。荧光扩增曲线展示的过程就是PCR实时的进程,去除最初几个循环内产物较少,荧光信号淹没在背景信号中的基线期外,整个PCR进程可以分成三个阶段:几何增长期、线性增长期和平台期。
几何增长期
又称为对数增长期或指数增长期。随着PCR反应的进行,扩增产物的荧光信号超过背景信号,进入呈J型增长的指数期,这个时期的PCR产物扩增最接近2的N次方的指数扩增,称为指数增长期。在对数图谱上表现为几近直线的部分。
线性增长期
几何增长期之后,由于反应体系中dNTP等原料消耗以及合成酶的酶活下降等原因,反应体系不再那么完美,所以PCR产物的增长不再遵循2的N次方扩增形式,而是以某个速率呈线性增长,这个阶段称为线性增长期。
平台期
在线性增长期之后,由于原料大量消耗等原因,PCR产物的扩增放缓或者停滞,扩增曲线表现为缓慢上升或者不上升,称为平台期。
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在三个各具特征的反应阶段中,哪个阶段更能代表我们初始模板的量,原因又是什么呢?点击观看完整视频,跟Rachel一起学习相关内容。
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