Taq Talk 第十一期 | 如何选择TaqMan探针标记?

2023-02-06 10:24:10, ABI 赛默飞世尔科技生命科学产品


在上一期Taq Talk中,我们学习了如何分析实时PCR数据。在本周第十一期的课程中,我们来了解哪种淬灭基团最适合实时PCR中的TaqMan探针


如何选择TaqMan探针标记

对于定制TaqMan探针,Applied Biosystems™为您提供三种可选的淬灭剂基团:MGB、QSY和TAMRA。但哪一种是您实验的最佳选择?


MGB探针

Applied Biosystems™ TaqMan® MGB探针为实时荧光PCR应用提供了业界领先的特异性和灵敏度,长期以来被认为是qPCR的金标准。我们使用最高质量的专有原材料生产MGB探针已有20多年的历史,并一直在不断完善独特的制造工艺,旨在为您提供研究所依赖的质量和性能。


MGB探针长度更短、特异性更强

TaqMan MGB探针是双标记探针,探针的5ʹ端标记有荧光报告基团,3ʹ端标记有非荧光淬灭基团(NFQ)。与其他以探针为基础的化学物质不同的是,TaqMan MGB探针3ʹ端包含了一个小沟结合物(因此命名为“MGB”)部分,可以增加探针的熔解温度(Tm)并稳定探针与靶标的复合物。因此,TaqMan MGB探针明显短于传统探针,可提供更好的序列鉴别能力和灵活性,以适应更多的靶标。


MGB探针的非荧光淬灭基团(NFQ)可最大限度提高灵敏度

TaqMan MGB探针通过NFQ基团淬灭另一端荧光报告基团所产生的信号。因MGB探针长度较短,TaqMan MGB探针本底信号低于非MGB NFQ探针。更低的本底信号意味着更高的灵敏度和精确度。


实时荧光PCR反应中,TaqMan MGB探针的动态范围、灵敏度和再现性优于非MGB探针

图表1 TaqMan MGB探针提供更佳灵敏度和精确度。比较两种18S rRNA 5ʹ核酸酶 PCR 检测方法。使用 Applied Biosystems™ TaqMan® 基因表达检测(FAM 基团标记,NFQ基团淬灭)或非 MGB 检测(FAM 基团标记,BHQ基团淬灭)在跨越6个数量级的起始模板的所有数据点中,TaqMan MGB检测的 Ct 值更低,再现性更好。此外,TaqMan MGB检测的信号更高,本底更低,因此灵敏度更佳。


QSY探针

Applied Biosystems™ TaqMan® QSY探针,保持灵敏度与特异性的同时帮助您充分提高多重检测应用PCR反应性能,给您的多重荧光定量PCR检测又添利器。


QSY探针适用于单管多重检测

采用TaqMan QSY探针进行多重检测可以节省成本,减少样品用量,同时还可以通过一次定量试验,获得堪比4次单管反应的结果。

图表2 单重反应的结果与多重检测的结果相近。扩增图显示了4个EGFR探针进行单重(蓝色)和4重反应扩增的检测曲线线性度比例,试验中每10 µL反应物依次采用了按比例稀释的20,000 pg至2 pg参照克隆cDNA。


QSY探针无需重新设计,可直接由BHQ探针转换

QSY探针使用非荧光猝灭基团,保障报告基团信号读取更准确,提高检测灵敏度


点击视频,观看Darlene带来的更多关于TaqMan探针淬灭基团选择的讲解。

Applied Biosystems™作为qPCR品牌领导者,为基础科研和转化研究提供完整解决方案,通过优质的产品和优化的流程协同增效,助力研究者获得准确、可重复的结果。在TaqMan探针领域,我们有超过20年的研发、生产经验,为您提供可靠而全面的探针标记选择。


Applied Biosystems TaqMan

探针解决方案


点击文末“阅读原文”,了解更多定制TaqMan探针相关信息。


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 Taq Talk第二期 | 实时PCR反应的三个阶段及其重要性

 Taq Talk第三期 | 实时PCR中的Ct值

 Taq Talk第四期 | TaqMan检测的工作原理

 Taq Talk第五期 | qPCR预混液的选择

 Taq Talk第六期 | TaqMan检测设计小贴士

Taq Talk第八期 | 如何评价检测中的PCR效率

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 Taq Talk第十期 | 如何分析实时PCR数据?



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