Taq Talk第三期 | 实时PCR中的Ct值

上一期Taq Talk课程中，我们学习了实时PCR反应的三个阶段及其重要性，在本周的第三期课程中，我们一起来了解实时PCR中最常提及、最重要的中间数据：Ct值。

在上一期视频的最后，我们了解到需要在实时PCR的几何扩增阶段设置阈值，才能进行定量分析，阈值是一个人为规定的荧光强度值，穿过阈值与X轴做一条平行的直线称为阈值线，阈值线划好之后，它与每条扩增曲线都有一个交点，这个交点所对应的循环数，即是qPCR实验中的Ct值。

循环阈值 (Ct) ，就是反应的荧光信号与阈值交叉的循环数。Ct值可用于计算起始 DNA 拷贝数，因为 Ct 值与起始靶点量呈反比。例如，比较含有不同靶点量的样本的实时荧光定量 PCR 结果时，如果第一个样本扩增前起始的靶基因拷贝数是后一个样本的两倍，较之第二个样本，第一个样本可提早一个循环生成 Ct。前提是上述两个反应的PCR 的工作效率均为 100% (即每个循环后产物量均实现倍增)。模板量越低，出现明显扩增的循环数越高。模板按 10 倍稀释，则 Ct 值递减 3.3 个循环。