【应用分享】中药小茴香的33种农残测定分析

2022-06-16 15:15:08


中药小茴香

本品为伞形科植物茴香的干燥成熟果实,含有挥发油类、色素类成分。针对这个品种我们推荐快速样品处理法(QuEChERS)。

今天,我们来看看小茴香项目的前处理效果吧。

适用范围

本方法参考中国药典2020版2341第五法中的QuEChERS法。

实验步骤

一 / 对照品溶液的制备

1.1 混合对照品配制

精密量取禁用农药混合对照溶液1 mL,置20 mL量瓶中,加乙腈稀释至刻度,摇匀,备用;

1 .2 气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备

取磷酸三苯酯对照品适量,精密称定,加乙腈溶解并制成每1 mL含1.0 mg的溶液,即得。精密量取适量,加乙腈制成每1 mL含0.1 μg的溶液。

1.3 空白基质溶液的制备

取小茴香空白基质样品,同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。

1.4 基质混合对照溶液的制备

分别精密量取空白基质溶液1.0 mL(6份),置氮吹仪上,40 °C 水浴浓缩至约0.6 mL,分别加入混合对照品溶液10 μL、20 μL、50 μL、100 μL、150 μL、200 μL,加乙腈稀释至1 mL,涡旋混匀,即得。

二 / 供试品溶液的制备(QuEChERS法)

提取:取小茴香粉末(过3号筛)3 g,精密称定,置50 mL聚苯乙烯具塞离心管中,加入1%冰醋酸溶液15 mL,涡旋使药粉充分浸润,放置30 min,精密加入乙腈15 mL,涡旋使混匀,置振荡器上剧烈振荡(500 次/min)5 min,加入QS-002盐包,立即摇散,再置振荡器上剧烈振荡(500 次/min)3 min,于冰浴中冷却10 min,离心(4000 转/min)5 min,待净化。

三 / 净化

Q法净化管:Q-15PCSG01 SelectCore QuEChERS净化管 15 mL,900 mg MgSO4,300 mg PSA,300 mg C18,300 mg Silica,90 mg GCB

净化:取上述提取液上清液9 mL置Q-15PCSG01净化管中涡旋使充分混匀,置振荡器上剧烈振荡(500 次/min)5 min使净化完全,离心(4000 转/min)5 min,即得。

GC-MS/MS测定:精密吸取上清液5 mL,置氮吹仪上于35 ℃水浴浓缩至约0.4 mL,加入混合对照品液再加乙腈稀释至1.0 mL,涡旋混匀,再加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液,混匀,过0.22 μm尼龙针式过滤器,上机分析。

LC-MS/MS测定:精密吸取上清液5 mL,置氮吹仪上于35 ℃水浴浓缩至约0.4 mL,加入混合对照品液再加乙腈稀释至1.0 mL,涡旋混匀,再加入0.3 mL水,混匀,过0.22 μm尼龙针式过滤器,上机分析。

四 / 气相色谱-串联质谱法(岛津 GC-MS-TQ8040 NX)

4.1  色谱条件 

色谱柱:        NanoChrom BP-50+MS

规格:           30 m×0.25 mm×0.25 μm

进样口温度: 250 ℃

升温程序:

初始温度为60 ℃,保持1 min;

以10 ℃/min升温至160 ℃;

再以2 ℃/min升温至230 ℃;

最后以15 ℃/min升温至300 ℃, 保持6 min;

载气:           高纯氦气(纯度>99.999%);

进样方式:    不分流进样;

恒压模式:    146 kPa;

进样量:        1 μL

4.2  质谱条件 

电离方式:    电子轰击电离源(EI);

电离能量:    70 Ev;

接口温度:    250 ℃;

离子源温度:   250 ℃;

监测方式:    多反应监测模式(MRM);

溶剂延迟:    10 min

五 / 高效液相色谱-串联质谱法(岛津 LC-MS 8045)

5.1  色谱条件

色谱柱:      ChromCore C18-MS Pesticides

规格:          2.6 μm,2.1×100 mm

流动相:

A:0.1%甲酸水溶液(含有5 mmol/L甲酸铵)

B:乙腈-0.1%甲酸水溶液(含有5 mmol/L甲酸铵)=95:5

流速:          0.3 mL/min

柱温:          40 ℃

进样量:       2 µL

梯度:

时间

(min)

流速

(mL/min)

流动相A

(%)

流动相B

(%)

0

0.3

70301

0.3

703012

0.3

0

100

14

0.3

0

100

14.1

0.3

703016

0.3

7030

5.2  质谱条件

离子源:             电喷雾离子源(Electrospray ionization, ESI) 正离子扫描

监测方式:       多反应监测(Multiple Reaction Monitoring, MRM)

接口电压:       4.5 kV

雾化气:          氮气3.0 L/min

加热气:          干燥空气10.0 L/min

DL温度:         250 ℃

加热模块温度:400 ℃

接口温度:       300 ℃

干燥气:          N2 10 L/min

六 / 实验结果

QuEChERS法处理小茴香基质LOQ浓度点加标谱图

(GC-MS/MS方法)

QuEChERS法处理小茴香基质LOQ浓度点加标谱图

(LC-MS/MS方法)

表(1)小茴香中33种农药残留的测定添加回收结果(%)

七 / 实验结论

通过以上实验数据可以看出,小茴香使用QuEChERS法提取效果较为理想,搭配Q-15PCSG01净化管净化后的小茴香样品回收率较好,为小茴香的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。

中药农残相关实验耗材:

方法类别

推荐产品

货号

适用品种

快速样品

处理法

SelectCore QuEChERS 萃取盐包

6g MgSO4, 1.5g NaOAc; 50/pkg

QS-002

川桐皮、川赤芍、木通、通草、灯心草、白芍、麦冬、泽泻、益智、姜黄、枸杞、大枣等含碳水化合物和少量色素类

SelectCore QuEChERS 净化管

15mL, 900mg MgSO4, 300mg PSA, 300mg C18, 300mg Silica, 90mg GCB; 50/pkg

Q-15PCSG01

注意事项:

前处理步骤较多,提取效率较为充分,溶液颜色较深,基质标每次只能一个点,加入盐包时会放热,注意冰浴降温

对杀虫脒有吸附,回收率可能偏低

SelectCore QuEChERS 净化管 15mL, Pesticide Residue A06(含色素挥发油中药农残Q法); 50/pkg

Q-15A06

木香、厚朴、羌活等含挥发油和色素类

注意事项:

改良后的配方可以吸附更多的色素和挥发油基质

SelectCore QuEChERS 净化管15mL, Pesticide Residue A07(丹参中药农残Q法); 50/pkg

Q-15A07

丹参专用

注意事项:

改良后的配方提高了丹参农残测定的稳定性和重现性

固相萃取方法1

SelectCore QuEChERS 净化管

15mL, 1200mg MgSO4, 300mg PSA, 100mg C18; 50/pkg

Q-15PC04

基质简单,色素较少如:人参、西洋参、茯苓、白芍、山药、隔山撬、浙贝母、麦冬、葛根、粉葛、川赤芍、赤芍、白附片、川木通、桑白皮、三七、黄芪、甘草、天花粉

注意事项:

适用于含有较多有机酸和糖干扰的样品,对磺隆类和杀虫脒化合物吸附较强

固相萃取方法2

SelectCore HLB固相萃取柱

200mg/6mL; 30/pkg

HLB060-060200-1

紫草、北柴胡、陈皮、山楂、大黄、柴胡、当归、党参、地黄、防风、黄芪、桔梗、苦参、益母草、黄精、灵芝、茯苓、大青叶、板蓝根、甘草等含少量色素类

注意事项:

吸附色素能力相比固相1要好,对滴滴滴类化合物吸附力较强故GC-MS/MS样品分析不适用,多用于LC-MS/MS样品净化

SelectCore HLB-A中药农残专用柱

200mg/6mL; 30/pkg

HLBA60-060200-1

千年健、桃仁、苦杏仁、花椒、没药、紫苏叶、厚朴、金银花、艾叶、款冬花、乌梅、桑叶、牛蒡子、菟丝子、酸枣仁、莪术、槟榔、小茴香、枳实、郁金、白头翁、菊花、陈皮、白花蛇舌草、褚实子、化橘红、川防风、当归等富含挥发油和色素类气质质测定项目

注意事项:

对磺隆类化合物吸附力强,且对三氯杀螨醇类、滴滴滴类化合物具有一定吸附作用,故LC-MS/MS样品分析不适用,GC-MS/MS样品分析需5mL样品上柱净化

SelectCore HLB-B中药农残专用柱

200mg/6mL; 30/pkg

HLBB60-060200-1

色素较多,挥发油较多如:火麻仁、菟丝子、厚朴、酸枣仁、羌活、川芎、莪术、蛇床子、紫苏叶、姜黄、干姜、陈皮、枳实、青皮s、防风、莱菔子、槟榔、当归、小茴香、豆蔻、黄连、黄柏、虎杖、大黄、马钱子、化橘红、当归

注意事项:

对滴滴滴类化合物具有一定吸附性,适用于LC-MS/MS样品分析,3mL样品上柱净化

SelectCore HLB-C中药农残专用柱

500mg/6mL; 30/pkg

HLBC60-060500-1

血竭、补骨脂、吴茱萸、沉香、没药、蛇床子、火麻仁、小茴香、马钱子等富含挥发油、色素和生物碱类气质质测定项目

适用于重油重色素和生物碱的果实和种子类中药,GC-MS/MS样品分析需2mL样品上柱净化

固相萃取方法3

SelectCore GCB/NH2-II 固相萃取柱

500mg/500mg/6mL; 30/pkg

GN100-061000-2

色素含量多,含少量挥发油如:金银花、菊花、款冬花、忍冬花、益母草、淫羊藿、龙胆草、大黄、虎杖、何首乌、麻黄、苦丁茶、刘寄奴、山银花、忍冬藤、川牛膝、地黄、桑叶

注意事项:

洗脱液中有甲苯,毒性较大,且洗脱时间较长;

对磺隆类农药有一定吸附LC-MS/MS样品分析时应联合其他净化方式分析磺隆类数据

SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱

500mg/500mg/6mL; 30/pkg

GNA100-061000-1

紫草、黄连、黄柏、何首乌、干益母草、吴茱萸、虎杖、大黄、决明子、胡黄连、苕叶细辛、菊花、千里光、蒲公英、艾叶、荆芥、茵陈、金银花、番泻叶、龙胆草、蛇床子、川乌、草乌、车前子、地耳草、金钱草、薄荷、广藿香、老鹳草、紫苏叶、忍冬藤、栀子、连翘、莲子心、竹叶柴胡、矮地茶、红景天、麻黄、白鲜皮、赶黄草、款冬花等

注意事项:

适用于干扰较为严重的GC-MS/MS样品分析。若用于LC-MS/MS样品分析,应联合其他净化方式

液相色谱柱

ChromCore C18-MS Pesticides

2.6μm, 2.1×100mm

S013-026018-02110S

气相色谱柱

NanoChrom BP-50+MS

0.25μm,30m×0.25mm

G5025-3002


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