【应用分享】中药小茴香的33种农残测定分析

2022-06-16 15:15:08

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中药小茴香

本品为伞形科植物茴香的干燥成熟果实，含有挥发油类、色素类成分。针对这个品种我们推荐快速样品处理法（QuEChERS）。

今天，我们来看看小茴香项目的前处理效果吧。

适用范围

本方法参考中国药典2020版2341第五法中的QuEChERS法。

实验步骤

一 / 对照品溶液的制备

1.1 混合对照品配制

精密量取禁用农药混合对照溶液1 mL，置20 mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用；

1 .2 气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备

取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每1 mL含1.0 mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每1 mL含0.1 μg的溶液。

1.3 空白基质溶液的制备

取小茴香空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。

1.4 基质混合对照溶液的制备

分别精密量取空白基质溶液1.0 mL(6份），置氮吹仪上，40 °C 水浴浓缩至约0.6 mL，分别加入混合对照品溶液10 μL、20 μL、50 μL、100 μL、150 μL、200 μL，加乙腈稀释至1 mL，涡旋混匀，即得。

二 / 供试品溶液的制备（QuEChERS法）

提取：取小茴香粉末（过3号筛）3 g，精密称定，置50 mL聚苯乙烯具塞离心管中，加入1%冰醋酸溶液15 mL，涡旋使药粉充分浸润，放置30 min，精密加入乙腈15 mL，涡旋使混匀，置振荡器上剧烈振荡（500 次/min）5 min，加入QS-002盐包，立即摇散，再置振荡器上剧烈振荡（500 次/min）3 min，于冰浴中冷却10 min，离心（4000 转/min）5 min，待净化。

三 / 净化

Q法净化管：Q-15PCSG01 SelectCore QuEChERS净化管 15 mL，900 mg MgSO4，300 mg PSA，300 mg C18，300 mg Silica，90 mg GCB

净化：取上述提取液上清液9 mL置Q-15PCSG01净化管中涡旋使充分混匀，置振荡器上剧烈振荡（500 次/min）5 min使净化完全，离心（4000 转/min）5 min，即得。

GC-MS/MS测定：精密吸取上清液5 mL，置氮吹仪上于35 ℃水浴浓缩至约0.4 mL，加入混合对照品液再加乙腈稀释至1.0 mL，涡旋混匀，再加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。

LC-MS/MS测定：精密吸取上清液5 mL，置氮吹仪上于35 ℃水浴浓缩至约0.4 mL，加入混合对照品液再加乙腈稀释至1.0 mL，涡旋混匀，再加入0.3 mL水，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。

四 / 气相色谱-串联质谱法（岛津 GC-MS-TQ8040 NX）

4.1 色谱条件

色谱柱： NanoChrom BP-50+MS

规格： 30 m×0.25 mm×0.25 μm

进样口温度： 250 ℃

升温程序：

初始温度为60 ℃，保持1 min；

以10 ℃/min升温至160 ℃；

再以2 ℃/min升温至230 ℃;

最后以15 ℃/min升温至300 ℃, 保持6 min；

载气： 高纯氦气（纯度>99.999%）；

进样方式： 不分流进样；

恒压模式： 146 kPa；

进样量： 1 μL

4.2 质谱条件

电离方式： 电子轰击电离源（EI）；

电离能量： 70 Ev；

接口温度： 250 ℃；

离子源温度: 250 ℃；

监测方式： 多反应监测模式（MRM）；

溶剂延迟： 10 min

五 / 高效液相色谱-串联质谱法（岛津 LC-MS 8045）

5.1 色谱条件

色谱柱： ChromCore C18-MS Pesticides

规格： 2.6 μm，2.1×100 mm

流动相：

A:0.1%甲酸水溶液(含有5 mmol/L甲酸铵)

B:乙腈-0.1%甲酸水溶液(含有5 mmol/L甲酸铵)=95:5

流速： 0.3 mL/min

柱温： 40 ℃

进样量： 2 µL

梯度：

时间 (min)	流速 (mL/min)	流动相A (%)	流动相B (%)
0	0.3	70	30
1	0.3	70	30
12	0.3	0	100
14	0.3	0	100
14.1	0.3	70	30
16	0.3	70	30

5.2 质谱条件

离子源: 电喷雾离子源(Electrospray ionization, ESI) 正离子扫描

监测方式： 多反应监测(Multiple Reaction Monitoring, MRM)

接口电压： 4.5 kV

雾化气： 氮气3.0 L/min

加热气： 干燥空气10.0 L/min

DL温度： 250 ℃

加热模块温度：400 ℃

接口温度： 300 ℃

干燥气： N₂ 10 L/min

六 / 实验结果

QuEChERS法处理小茴香基质LOQ浓度点加标谱图

（GC-MS/MS方法）

QuEChERS法处理小茴香基质LOQ浓度点加标谱图

（LC-MS/MS方法）

表（1）小茴香中33种农药残留的测定添加回收结果（%）

七 / 实验结论

通过以上实验数据可以看出，小茴香使用QuEChERS法提取效果较为理想，搭配Q-15PCSG01净化管净化后的小茴香样品回收率较好，为小茴香的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。

中药农残相关实验耗材：

方法类别	推荐产品	货号	适用品种
快速样品处理法	SelectCore QuEChERS 萃取盐包 6g MgSO4, 1.5g NaOAc; 50/pkg	QS-002	川桐皮、川赤芍、木通、通草、灯心草、白芍、麦冬、泽泻、益智、姜黄、枸杞、大枣等含碳水化合物和少量色素类
	SelectCore QuEChERS 净化管 15mL, 900mg MgSO4, 300mg PSA, 300mg C18, 300mg Silica, 90mg GCB; 50/pkg	Q-15PCSG01
	注意事项：前处理步骤较多，提取效率较为充分，溶液颜色较深，基质标每次只能一个点，加入盐包时会放热，注意冰浴降温对杀虫脒有吸附，回收率可能偏低
	SelectCore QuEChERS 净化管 15mL, Pesticide Residue A06(含色素挥发油中药农残Q法); 50/pkg	Q-15A06	木香、厚朴、羌活等含挥发油和色素类
	注意事项：改良后的配方可以吸附更多的色素和挥发油基质
	SelectCore QuEChERS 净化管15mL, Pesticide Residue A07(丹参中药农残Q法); 50/pkg	Q-15A07	丹参专用
	注意事项：改良后的配方提高了丹参农残测定的稳定性和重现性
固相萃取方法 1	SelectCore QuEChERS 净化管 15mL, 1200mg MgSO4, 300mg PSA, 100mg C18; 50/pkg	Q-15PC04	基质简单，色素较少如：人参、西洋参、茯苓、白芍、山药、隔山撬、浙贝母、麦冬、葛根、粉葛、川赤芍、赤芍、白附片、川木通、桑白皮、三七、黄芪、甘草、天花粉
	注意事项：适用于含有较多有机酸和糖干扰的样品，对磺隆类和杀虫脒化合物吸附较强
固相萃取方法 2	SelectCore HLB固相萃取柱 200mg/6mL; 30/pkg	HLB060-060200-1	紫草、北柴胡、陈皮、山楂、大黄、柴胡、当归、党参、地黄、防风、黄芪、桔梗、苦参、益母草、黄精、灵芝、茯苓、大青叶、板蓝根、甘草等含少量色素类
	注意事项：吸附色素能力相比固相1要好，对滴滴滴类化合物吸附力较强故GC-MS/MS样品分析不适用，多用于LC-MS/MS样品净化
	SelectCore HLB-A中药农残专用柱 200mg/6mL; 30/pkg	HLBA60-060200-1	千年健、桃仁、苦杏仁、花椒、没药、紫苏叶、厚朴、金银花、艾叶、款冬花、乌梅、桑叶、牛蒡子、菟丝子、酸枣仁、莪术、槟榔、小茴香、枳实、郁金、白头翁、菊花、陈皮、白花蛇舌草、褚实子、化橘红、川防风、当归等富含挥发油和色素类气质质测定项目
	注意事项：对磺隆类化合物吸附力强，且对三氯杀螨醇类、滴滴滴类化合物具有一定吸附作用，故LC-MS/MS样品分析不适用，GC-MS/MS样品分析需5mL样品上柱净化
	SelectCore HLB-B中药农残专用柱 200mg/6mL; 30/pkg	HLBB60-060200-1	色素较多，挥发油较多如：火麻仁、菟丝子、厚朴、酸枣仁、羌活、川芎、莪术、蛇床子、紫苏叶、姜黄、干姜、陈皮、枳实、青皮s、防风、莱菔子、槟榔、当归、小茴香、豆蔻、黄连、黄柏、虎杖、大黄、马钱子、化橘红、当归
	注意事项：对滴滴滴类化合物具有一定吸附性，适用于LC-MS/MS样品分析，3mL样品上柱净化
	SelectCore HLB-C中药农残专用柱 500mg/6mL; 30/pkg	HLBC60-060500-1	血竭、补骨脂、吴茱萸、沉香、没药、蛇床子、火麻仁、小茴香、马钱子等富含挥发油、色素和生物碱类气质质测定项目
	适用于重油重色素和生物碱的果实和种子类中药，GC-MS/MS样品分析需2mL样品上柱净化
固相萃取方法 3	SelectCore GCB/NH₂-II 固相萃取柱 500mg/500mg/6mL; 30/pkg	GN100-061000-2	色素含量多，含少量挥发油如：金银花、菊花、款冬花、忍冬花、益母草、淫羊藿、龙胆草、大黄、虎杖、何首乌、麻黄、苦丁茶、刘寄奴、山银花、忍冬藤、川牛膝、地黄、桑叶
	注意事项：洗脱液中有甲苯，毒性较大，且洗脱时间较长；对磺隆类农药有一定吸附LC-MS/MS样品分析时应联合其他净化方式分析磺隆类数据
	SelectCore GCB/NH₂-A 固相萃取柱 500mg/500mg/6mL; 30/pkg	GNA100-061000-1	紫草、黄连、黄柏、何首乌、干益母草、吴茱萸、虎杖、大黄、决明子、胡黄连、苕叶细辛、菊花、千里光、蒲公英、艾叶、荆芥、茵陈、金银花、番泻叶、龙胆草、蛇床子、川乌、草乌、车前子、地耳草、金钱草、薄荷、广藿香、老鹳草、紫苏叶、忍冬藤、栀子、连翘、莲子心、竹叶柴胡、矮地茶、红景天、麻黄、白鲜皮、赶黄草、款冬花等
	注意事项：适用于干扰较为严重的GC-MS/MS样品分析。若用于LC-MS/MS样品分析，应联合其他净化方式
液相色谱柱	ChromCore C18-MS Pesticides 2.6μm, 2.1×100mm		S013-026018-02110S
气相色谱柱	NanoChrom BP-50+MS 0.25μm，30m×0.25mm		G5025-3002