【应用分享】高油脂中药木香的33种农残测定分析

2022-06-16 15:15:08

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中药木香

33种农残测定分析

木香为菊科植物木香的干燥根，含大量油脂类成分。这些成分对GC/MS/MS色谱柱污染较为严重，易造成目标保留时间漂移和丢峰，常规的固相萃取法一、固相萃取法二、固相萃取法三都不能很好的净化。因此纳谱分析根据木香油脂成分特点，在优化填料的同时优化了木香的提取方式。优化后的方案可以有效地减轻木香GC/MS/MS分析中存在的问题，降低了样品中油脂成分对色谱柱的污染和基质效应。

今天，我们来看看木香项目的前处理效果吧~

适用范围

本方法参考中国药典2020版2341第五法中的快速样品处理法（QuEChERS）法。

实验步骤

一

对照品溶液的配制

1.1 混合对照品配制

精密量取禁用农药混合1 mL，置20 mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用。

1.2 气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备

取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每1 mL含1.0 mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每1 mL含0.1 μg的溶液。

1.3 空白基质溶液的制备

取木香空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。

1.4 基质混合对照溶液的制备

分别精密量取空白基质溶液1.0 mL(6份），置氮吹仪上，40 °C 水浴浓缩至约0.6 mL，分别加入混合对照品溶液10 μL、20 μL、50 μL、100 μL、150 μL、200 μL，加乙腈稀释至1 mL，涡旋混匀，即得。

二

供试品溶液的制备（QuEChERS法）

2.1

GC-MS/MS样品

2.1.1

提取

取木香粉末（过3号筛）3 g，精密称定，置50 mL聚苯乙烯具塞离心管中，加入水15 mL，涡旋使药粉充分浸润，放置30 min，精密加入乙腈15 mL，涡旋使混匀，置振荡器上剧烈振荡（500次/分）5 min，加入QS-002盐包，立即摇散，再置振荡器上剧烈振荡（500次/分）3 min，于冰浴中冷却10分钟，离心（4000转/分）5分钟，待净化。

2.1.2

净化

SPE净化管：Q-15A06 SelectCore QuEChERS净化管15 mL, Pesticide Residue A06（含色素挥发油中药农残Q法）

净化：取上述提取液上清液9 mL置Q-15A06净化管中涡旋使充分混匀，置振荡器上剧烈振荡（500次/分）5分钟使净化完全，离心（4000转/分）5分钟，即得。

2.1.3

分析

GC-MS/MS测定：精密吸取上清液1 mL，置氮吹仪上于35 ℃水浴浓缩至约0.4 mL，加入混合对照品液再加乙腈稀释至1.0 mL，涡旋混匀，再加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液，混匀，过0.22 μm滤头，上机分析。

2.2

LC-MS/MS样品

2.2.1

提取

取木香粉末（过3号筛）3 g，精密称定，置50 mL聚苯乙烯具塞离心管中，加入1%冰醋酸溶液15 mL，涡旋使药粉充分浸润，放置30 min，精密加入乙腈15 mL，涡旋使混匀，置振荡器上剧烈振荡（500次/分）5分钟，加入QS-002盐包，立即摇散，再置振荡器上剧烈振荡（500次/分）3分钟，于冰浴中冷却10分钟，离心（4000转/分）5分钟，待净化。

2.2.2

净化

Q法净化管：Q-15A06 SelectCore QuEChERS净化管15 mL, Pesticide Residue A06（含色素挥发油中药农残Q法）

净化：取上述提取液上清液9 mL置Q-15A06净化管中涡旋使充分混匀，置振荡器上剧烈振荡（500次/分）5分钟使净化完全，离心（4000转/分）5分钟，即得。

2.2.3

分析

LC-MS/MS测定：精密吸取上清液5 mL，置氮吹仪上于35 ℃水浴浓缩至约0.4 mL，加入混合对照品液再加乙腈稀释至1.0 mL，涡旋混匀，再加入0.3 mL水，混匀，过0.22 μm滤头，上机分析。

三

气相色谱-串联质谱法

（岛津 GC-MS -TQ8040 NX）

色谱条件

色谱柱：NanoChrom BP-50+MS, 30 m×0.25 mm×0.25 μm;

进样口温度：250 ℃；

升温程序：初始温度为60 ℃，保持1 min；以10 ℃/min升温至160 ℃；再以2 ℃/min升温至230 ℃，最后以15 ℃/min升温至300 ℃，保持6 min；

载气：高纯氦气（纯度>99.999%）；

进样方式：不分流进样；

恒压模式：146 kPa；

进样量：1 μL。

质谱条件

电离方式：电子轰击电离源（EI）；

电离能量：70 Ev；

接口温度：250 ℃；

离子源温度：250 ℃；

监测方式：多反应监测模式（MRM）；

溶剂延迟：10 min。

GC/MS/MS监测目标物注意事项：样品浓度为0.2 g/mL；前加标建议加300 μL混合对照品提取，浓度为标准曲线第二个浓度点浓度（20 μL/mL）。由于样品浓度较低，建议分析前重新调谐检查灯丝能量后再进行分析，仪器灵敏度过低可能导致对硫磷丢峰或分析结果不准确。

氟虫腈和氟虫腈亚砜 保留时间往后漂移1.8 min左右（参考）

四

高效液相色谱-串联质谱法

（岛津 LC-MS 8045）

色谱条件

色谱柱：ChromCore C18-MS Pesticides, 2.6 μm,2.1×100 mm

流动相：

A：0.1%甲酸水溶液（含有5 mmol/L甲酸铵）

B：乙腈-0.1%甲酸水溶液（含有5 mmol/L甲酸铵）=95:5

流速: 0.3 mL/min

柱温: 40 ℃

进样量: 2 µL

梯度：

时间（min）	流速（mL/min）	流动相A （%）	流动相B （%）
0	0.3	70	30
1	0.3	70	30
12	0.3	0	100
14	0.3	0	100
14.1	0.3	70	30
16	0.3	70	30

质谱条件

离子源: 电喷雾离子源（Electrospray ionization，ESI）正离子扫描

监测方式：多反应监测（Multiple Reaction Monitoring，MRM）

离子源接口电压：4.5 kV

雾化气：氮气3.0 L/min

加热气：干燥空气10.0 L/min

DL温度：250 ℃

加热模块温度：400 ℃

接口温度：300 ℃

干燥气：N2 10 L/min

LC/MS/MS监测目标物注意事项：地虫硫磷、治螟磷 参考GC/MS/MS结果；

目标物	定量离子	CE电压	参考离子	CE电压	保留时间（参考）
水胺硫磷	291.00>231.00	-15	291.00>121.00	-30	5.106

挥发油基质样品自动进样器托盘温度不宜过低，否则个别样品会出现分层，导致分析结果不准确，建议20 ℃为宜。

表1 木香中33种农药残留的测定添加回收结果（%）

五

处理后溶液的颜色比对

木香基质加标GC/MS/MS部分化合物分析结果对比

a-硫丹（左为直接提取法HLB净化，右为QuEChERS法Q-15A06净化）

β-六六六（左为直接提取法HLB净化，右为QuEChERS法Q-15A06净化）

δ-六六六（左为直接提取法HLB净化，右为QuEChERS法Q-15A06净化）

p,p''-三氯杀螨醇（左为直接提取法HLB净化，右为QuEChERS法Q-15A06净化）

γ-六六六（左为直接提取法HLB净化，右为QuEChERS法Q-15A06净化）

对硫磷（左为直接提取法HLB净化，右为QuEChERS法Q-15A06净化）

甲基对硫磷左为直接提取法HLB净化，右为QuEChERS法Q-15A06净化

水胺硫磷左为直接提取法HLB净化，右为QuEChERS法Q-15A06净化

木香基质加标GC/MS/MS地虫硫磷出峰情况

木香基质加标LC/MS/MS部分化合物分析结果对比

水胺硫磷左为直接提取法HLB净化，右为QuEChERS法Q-15A06净化

六

实验讨论

通过以上实验对比数据可以看出，上述方案搭配SelectCore QuEChERS Q-15A06净化管净化后的木香样品溶液颜色较浅，且各化合物出峰较为良好，目标物保留时间漂移也得到了有效减弱，减少了污染GC/MS/MS柱前端的风险。SelectCore QuEChERS Q-15A06净化管针对木香中油脂类成分去除效果良好，联合上述解决办法有效地提高了实验效率，也为木香的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。

中药农残相关实验耗材

方法类别	推荐产品	货号	适用品种
快速样品处理法（QuEC-hERS）	SelectCore QuEChERS萃取盐包 6g MgSO4, 1.5g NaOAc; 50/pkg	QS-002	川桐皮、川赤芍、木通、通草、灯心草、白芍、麦冬、泽泻、益智、姜黄、枸杞、大枣等含碳水化合物和少量色素类
	SelectCore QuEChERS净化管 15mL, 900mg MgSO4, 300mg PSA, 300mg C18, 300mg Silica, 90mg GCB; 50/pkg	Q-15PCSG01
	注意事项：前处理步骤较多，提取效率较为充分，溶液颜色较深，基质标每次只能一个点加入盐包时会放热，注意冰浴降温对杀虫脒有吸附，回收率可能偏低
	SelectCore QuEChERS净化管 15mL, Pesticide Residue A06(含色素挥发油中药农残Q法); 50/pkg	Q-15A06	木香、厚朴、羌活等含挥发油和色素类
	注意事项：改良后的配方可以吸附更多的色素和挥发油基质
	SelectCore QuEChERS净化管15mL, Pesticide Residue A07(丹参中药农残Q法); 50/pkg	Q-15A07	丹参专用
	注意事项：改良后的配方提高了丹参农残测定的稳定性和重现性
固相萃取方法一	SelectCore QuEChERS净化管 15mL, 1200mg MgSO4, 300mg PSA, 100mg C18; 50/pkg	Q-15PC04	基质简单，色素较少如：人参、西洋参、茯苓、白芍、山药、隔山撬、浙贝母、麦冬、葛根、粉葛、川赤芍、赤芍、白附片、川木通、桑白皮、三七、黄芪、甘草、天花粉
	注意事项：适用于含有较多有机酸和糖干扰的样品，对磺隆类和杀虫脒化合物吸附较强
固相萃取方法二	SelectCore HLB固相萃取柱 200mg/6mL; 30/pkg	HLB060-060200-1	紫草、北柴胡、陈皮、山楂、大黄、柴胡、当归、党参、地黄、防风、黄芪、桔梗、苦参、益母草、黄精、灵芝、茯苓、大青叶、板蓝根、甘草等含少量色素类
	注意事项：吸附色素能力相比固相1要好，对滴滴滴类化合物吸附力较强故GCMSMS样品分析不适用，多用于LCMSMS样品净化
	SelectCore HLB-A中药农残专用柱 200mg/6mL; 30/pkg	HLBA60-060200-1	千年健、桃仁、苦杏仁、花椒、没药、紫苏叶、厚朴、金银花、艾叶、款冬花、乌梅、桑叶、牛蒡子、菟丝子、酸枣仁、莪术、槟榔、小茴香、枳实、郁金、白头翁、菊花、陈皮、白花蛇舌草、褚实子、化橘红、川防风、当归等富含挥发油和色素类气质质测定项目
	注意事项：对磺隆类化合物吸附力强，且对三氯杀螨醇类、滴滴滴类化合物具有一定吸附作用，故LCMSMS样品分析不适用，GCMSMS样品分析需5mL样品上柱净化
	SelectCore HLB-B中药农残专用柱 200mg/6mL; 30/pkg	HLBB60-060200-1	色素较多，挥发油较多如：火麻仁、菟丝子、厚朴、酸枣仁、羌活、川芎、莪术、蛇床子、紫苏叶、姜黄、干姜、陈皮、枳实、青皮、防风、莱菔子、槟榔、当归、小茴香、豆蔻、黄连、黄柏、虎杖、大黄、马钱子、化橘红、当归
	注意事项：对滴滴滴类化合物具有一定吸附性，适用于LCMSMS样品分析，3mL样品上柱净化
	SelectCore HLB-C中药农残专用柱 500mg/6mL; 30/pkg	HLBC60-060500-1	血竭、补骨脂、吴茱萸、沉香、没药、蛇床子、火麻仁、小茴香、马钱子等富含挥发油、色素和生物碱类气质质测定项目
	适用于重油重色素和生物碱的果实和种子类中药，GCMSMS样品分析需2mL样品上柱净化
固相萃取方法三	SelectCore GCB/NH₂-II固相萃取柱 500mg/500mg/6mL; 30/pkg	GN100-061000-2	色素含量多，含少量挥发油如：金银花、菊花、款冬花、忍冬花、益母草、淫羊藿、龙胆草、大黄、虎杖、何首乌、麻黄、苦丁茶、刘寄奴、山银花、忍冬藤、川牛膝、地黄、桑叶
	注意事项：洗脱液中有甲苯，毒性较大，且洗脱时间较长；对磺隆类农药有一定吸附LCMSMS样品分析时应联合其他净化方式分析磺隆类数据
	SelectCore GCB/NH₂-A固相萃取柱 500mg/500mg/6mL; 30/pkg	GNA100-061000-1	紫草、黄连、黄柏、何首乌、干益母草、吴茱萸、虎杖、大黄、决明子、胡黄连、苕叶细辛、菊花、千里光、蒲公英、艾叶、荆芥、茵陈、金银花、番泻叶、龙胆草、蛇床子、川乌、草乌、车前子、地耳草、金钱草、薄荷、广藿香、老鹳草、紫苏叶、忍冬藤、栀子、连翘、莲子心、竹叶柴胡、矮地茶、红景天、麻黄、白鲜皮、赶黄草、款冬花等
	注意事项：适用于干扰较为严重的GCMSMS样品分析。如若用于LCMSMS样品分析，应联合其他净化方式
液相色谱柱	ChromCore C18-MS Pesticides2.6 μm, 2.1×100 mm		S013-026018-02110S
气相色谱柱	NanoChrom BP-50+MS, 30m×0.25mm×0.25 μm		G5025-3002