【应用分享】搭配使用,干活不累——高挥发油中药蛇床子的33种农残测定分析

2022-06-16 15:18:45


背景

蛇床子为伞形科植物蛇床的干燥成熟果实,含有大量的挥发油、香豆素类成分,这些成分对GCMSMS分析中个别农残化合物保留时间漂移严重,LCMSMS分析中个别农残化合物干扰大,农残线性和回收率较差。常规的固相萃取法一、固相萃取法二、固相萃取法三都不能很好的净化。

纳谱分析近期针对以上含挥发油和色素样品分析存在的问题,在改进填料的吸附能力的同时,推出了一种组合固2前处理方法。相比常规固相萃取方式,优化后的两种HLB固相萃取柱可以有所针对性的吸附更多色素、挥发油类成分,从而降低了样品中色素对色谱柱的污染和挥发油引起的基质效应,有效的提高了样品分析时农残目标物的准确性。

今天,我们来看看蛇床子项目的前处理效果吧。

适用范围

本方法参考中国药典2020版2341第五法中的固相萃取法2,适用于含有挥发油、色素类基质干扰大和色素较多的中药材农残检测。

实验步骤

对照品溶液的制备

1对照品溶液的制备

1.1 混合对照品配制

精密量取禁用农药混合1mL,置20mL量瓶中,加乙腈稀释至刻度,摇匀,备用;

1 .2 气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备

取磷酸三苯酯对照品适量,精密称定,加乙腈溶解并制成每1mL含1.0mg的溶液,即得。精密量取适量,加乙腈制成每1mL含0.1μg的溶液。

1.3 空白基质溶液的制备

取空白基质样品,同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。

1.4 基质混合对照溶液的制备

分别精密量取空白基质溶液1.0mL(6份),置氮吹仪上,40°C 水浴浓缩至约0.6mL,分别加入混合对照品溶液10μL、20 μL、50 μL、100μL、150μL、200μL,加乙腈稀释至lmL,涡旋混匀,即得。

供试品溶液的制备

2.1 提取

精密称取5g样品(3号筛),加氯化钠1g,加入50mL乙腈,匀浆处理2分钟,离心后分取上清液,残渣再加50mL乙腈,匀浆处理1分钟,离心后,合并两次提取上清液,减压浓缩至3~5mL,加乙腈定容至10mL,摇匀,待净化。

三净化

GCMSMS样品:

SPE柱:SelectCore HLB-A中药农残专用柱200mg/6mL

净化:量取上述蛇床子提取液5mL,过SelectCore HLB-A中药农残专用柱200mg/6mL,收集全部净化液,混匀,即得。

GC/MS/MS测定:精密量取过固相萃取柱氮吹定容后的溶液1mL,氮吹至0.4mL加入混合对照溶液,乙腈定容至1mL,再加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液,混匀,过0.22μm尼龙针式过滤器,上机分析。

LCMSMS样品:

SPE柱:SelectCore HLB-B中药农残专用柱200mg/6mL

净化:量取上述蛇床子提取液3mL,过SelectCore HLB-B中药农残专用柱200mg/6mL; 30/pkg,收集全部净化液,混匀,即得。

LC/MS/MS测定:精密量取过固相萃取柱后溶液1mL氮吹至0.4mL加入混合对照品液,乙腈定容至1mL,再加入0.3 mL水,混匀,过0.22μm尼龙针式过滤器,上机分析。

处理后溶液的颜色比对

从左至右分别是蛇床子提取液、蛇床子取液过SelectCore HLB-A 200mg/6mL小柱、蛇床子提取液过SelectCore HLB-B 200mg/6mL小柱

气相色谱-串联质谱法

(岛津 GC-MS -TQ8040 NX)

色谱条件

色谱柱:SHIMADZU SH-Rxi-17Sil MS,30m×0.25mm, 0.25μm;

进样口温度:250℃;

升温程序:初始温度为60℃,保持1min;以10℃/min升温至160℃;再以2℃/min升温至230℃,最后以15℃/min升温至300℃,保持6min;

载气:高纯氦气(纯度>99.999%);

进样方式:不分流进样;

恒压模式:146kPa;

进样量:1μL。

质谱条件

电离方式:电子轰击电离源(EI);

电离能量:70Ev;

接口温度:250℃;

离子源温度:250℃;

监测方式:多反应检测模式(MRM);

溶剂延迟:10.0min。

GCMSMS监测目标物注意事项:

内吸磷参考LCMSMS结果

氟甲腈保留时间往后漂移1.6min左右(数据仅供参考,下同)

氟虫腈亚砜保留时间往后漂移2min左右

氟虫腈保留时间往后漂移2min左右

氟虫腈砜保留时间往后漂移3.8min左右

苯线磷保留时间往后漂移2min左右

甲基硫环磷保留时间往后漂移2min左右

除草醚保留时间往后漂移0.5min左右

以上保留时间漂移的目标物需要重新采集定位后再创建总MRM分析方法监测,或使用LCMSMS来监测保留时间漂移的目标物(不包含除草醚)。

高效液相色谱-串联质谱法

(岛津 LC-MS 8045)

色谱条件

色谱柱:ChromCore C18-MS Pesticides中药农残专用柱(2.1 ×100 mm,2.6μm)

流动相:

A:0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L甲酸铵)

B:乙腈-0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L甲酸铵)=95:5

梯度:

时间

(min)

流速

(mL/min)

流动相A

(%)

流动相B

(%)

0

0.3

70301

0.3

703012

0.3

0

100

14

0.3

0

100

14.1

0.3

703016

0.3

7030

流速: 0.3mL/min

柱温: 40℃

进样量: 2µL

质谱条件

离子源: 电喷雾离子源(Electrospray ionization,ESI)正离子扫描

监测方式:多反应监测(Multiple Reaction Monitoring,MRM)

离子源接口电压:4.5kV

雾化气:氮气3.0L/min

加热气:干燥空气10.0L/min

DL温度:250℃

加热模块温度:400℃

接口温度:300℃

干燥气:N2 10L/min

LCMSMS监测目标物注意事项:

目标物

定量离子

CE电压

参考离子

CE电压

msec

保留时间(参考)

氟虫腈

434.90>81.00

15

434.90>249.80

305

7.341

氟甲腈

386.90>350.80

10

386.90>281.80

355

7.656

氟虫腈砜

450.90>281.80

30

450.90>243.80

665

8.093

氟虫腈亚砜

419.10>383.10

10

419.10>262.10

275

8.103

水胺硫磷

291.00>231.00

-15

291.00>121.00

-30

5

5.106

甲基硫环磷

228.00>168.1

-19

228.00>108.90

-33

5

0.886

以上目标物中氟虫腈类化合物均为负离子模式采集,甲基硫环磷和水胺硫磷为正离子模式采集。

由于分析化合物多,且存在正负离子模式同时采集,为提高仪器灵敏度可采用分段采集模式进行,分段采集可设置测定时间为各目标物保留时间前0.5min开始-目标物保留时间后0.5min结束。

挥发油基质样品自动进样器托盘温度不宜过低,否则个别样品会出现分层,导致分析结果不准确,建议25℃为宜。

化合物出峰情况

蛇床子基质加标GCMSMS分析保留时间漂移的化合物出峰情况

氟甲腈

氟虫腈亚砜

氟虫腈

氟虫腈砜

苯线磷

甲基硫环磷

蛇床子基质加标LCMSMS氟虫腈类和甲基硫环磷出峰情况

氟虫腈

氟甲腈

氟虫腈砜

氟虫腈亚砜

甲基硫环磷

添加回收率

表1   蛇床子中33种农药残留的的测定添加回收结果(%)

实验讨论

通过以上实验对比数据可以看出,SelectCore HLB-A 200mg/6mL小柱净化后的蛇床子样品溶液颜色较浅,减少了污染GCMSMS柱前端的风险。SelectCore HLB-B 200mg/6mL固相萃取柱对蛇床子中挥发油类成分祛除效果良好,减轻了由于基质中干扰物导致的LCMSMS上样品中部分目标物响应低的问题。这两款农残专用固相萃取柱,针对蛇床子中色素、挥发油类成分去除效果良好,搭配上述解决办法有效的提高了实验效率,也为蛇床子的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。

中药农残相关实验耗材:

方法类别

推荐产品

货号

适用品种

快速样品

处理法

(QuEC-hERS)

SelectCore QuEChERS 萃取盐包

6g MgSO4, 1.5g NaOAc; 50/pkg

QS-002

川桐皮、川赤芍、木通、通草、灯心草、白芍、麦冬、泽泻、益智、姜黄、枸杞、大枣等含碳水化合物和少量色素类

SelectCore QuEChERS 净化管

15mL, 900mg MgSO4, 300mg PSA, 300mg C18, 300mg Silica, 90mg GCB; 50/pkg

Q-15PCSG01

注意事项:

前处理步骤较多,提取效率较为充分,溶液颜色较深,基质标每次只能一个点

加入盐包时会放热,注意冰浴降温

对杀虫脒有吸附,回收率可能偏低

SelectCore QuEChERS 净化管 15mL, Pesticide Residue A06(含色素挥发油中药农残Q法); 50/pkg

Q-15A06

木香、厚朴、羌活等含挥发油和色素类

注意事项:

改良后的配方可以吸附更多的色素和挥发油基质

SelectCore QuEChERS 净化管15mL, Pesticide Residue A07(丹参中药农残Q法); 50/pkg

Q-15A07

丹参专用

注意事项:

改良后的配方提高了丹参农残测定的稳定性和重现性

固相萃取方法

SelectCore QuEChERS 净化管

15mL, 1200mg MgSO4, 300mg PSA, 100mg C18; 50/pkg

Q-15PC04

基质简单,色素较少如:人参、西洋参、茯苓、白芍、山药、隔山撬、浙贝母、麦冬、葛根、粉葛、川赤芍、赤芍、白附片、川木通、桑白皮、三七、黄芪、甘草、天花粉

注意事项:

适用于含有较多有机酸和糖干扰的样品,对磺隆类和杀虫脒化合物吸附较强

固相萃取方法

SelectCore HLB固相萃取柱

200mg/6mL; 30/pkg

HLB060-060200-1

北柴胡、陈皮、山楂、大黄、柴胡、当归、党参、地黄、防风、黄芪、桔梗、苦参、益母草、黄精、灵芝、茯苓、大青叶、板蓝根、甘草等含少量色素类

注意事项:

吸附色素能力相比固相1要好,对滴滴滴类化合物吸附力较强故GCMSMS样品分析不适用,多用于LCMSMS样品净化

SelectCore HLB-A中药农残专用柱

200mg/6mL; 30/pkg

HLBA60-060200-1

千年健、桃仁、苦杏仁、花椒、没药、紫苏叶、金银花、艾叶、款冬花、乌梅、桑叶、牛蒡子、菟丝子、酸枣仁、莪术、槟榔、小茴香、枳实、郁金、白头翁、菊花、陈皮、白花蛇舌草、褚实子、化橘红、川防风、当归等富含挥发油和色素类气质质测定项目

注意事项:

对磺隆类化合物吸附力强,且对三氯杀螨醇类、滴滴滴类化合物具有一定吸附作用,故LCMSMS样品分析不适用,GCMSMS样品分析需5mL样品上柱净化

SelectCore HLB-B中药农残专用柱

200mg/6mL; 30/pkg

HLBB60-060200-1

色素较多,挥发油较多如:火麻仁、菟丝子、酸枣仁、羌活、川芎、莪术、蛇床子、紫苏叶、姜黄、干姜、陈皮、枳实、青皮、防风、莱菔子、槟榔、当归、小茴香、豆蔻、黄连、黄柏、虎杖、大黄、马钱子、化橘红、当归

注意事项:

对滴滴滴类化合物具有一定吸附性,适用于LCMSMS样品分析,3mL样品上柱净化

SelectCore HLB-C中药农残专用柱

500mg/6mL; 30/pkg

HLBC60-060500-1

补骨脂、吴茱萸、木香、厚朴、沉香、没药、蛇床子、火麻仁、羌活、小茴香、马钱子等富含挥发油、色素和生物碱类气质质测定项目

适用于重油重色素和生物碱的果实和种子类中药,GCMSMS样品分析需2mL样品上柱净化

固相萃取方法三

SelectCore GCB/NH2-II 固相萃取柱

500mg/500mg/6mL; 30/pkg

GN100-061000-2

色素含量多,含少量挥发油如:金银花、菊花、款冬花、忍冬花、益母草、淫羊藿、龙胆草、大黄、虎杖、何首乌、麻黄、苦丁茶、刘寄奴、山银花、忍冬藤、川牛膝、地黄、桑叶

注意事项:

洗脱液中有甲苯,毒性较大,且洗脱时间较长;

对磺隆类农药有一定吸附LCMSMS样品分析时应联合其他净化方式分析磺隆类数据

SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱

500mg/500mg/6mL; 30/pkg

GNA100-061000-1

黄连、黄柏、何首乌、干益母草、吴茱萸、虎杖、大黄、决明子、胡黄连、苕叶细辛、菊花、千里光、蒲公英、艾叶、荆芥、茵陈、金银花、番泻叶、龙胆草、蛇床子、川乌、草乌、车前子、地耳草、金钱草、薄荷、广藿香、老鹳草、紫苏叶、忍冬藤、栀子、连翘、莲子心、竹叶柴胡、矮地茶、红景天、麻黄、白鲜皮、赶黄草、款冬花等

注意事项:

适用于干扰较为严重的GCMSMS样品分析。如若用于LCMSMS样品分析,应联合其他净化方式

液相色谱柱

ChromCore C18-MS Pesticides 2.6μm, 2.1×100mm

S013-026018-02110S

气相色谱柱

NanoChrom BP-50+MS, 30m×0.25mm×0.25um

G5025-3002

试用方法:


  • 客服电话: 400-6699-117 转 1000
  • 京ICP备07018254号
  • 电信与信息服务业务经营许可证:京ICP证110310号
  • 京公网安备1101085018
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