【应用分享】中药厚朴的33种农残测定分析

2022-06-16 15:25:47

背景

自2020版中国药典四部2341农药残留量测定法中新增第五法，药材及饮片(植物类)中禁用农药多残留测定法，部分中药检测企业反馈厚朴药材由于含有酚类、挥发油类、生物碱类等，基质效应较为严重，药典规定的4种前处理方法都难以解决。

纳谱分析根据挥发油成分特点，调整亲水亲脂聚乙烯吡咯烷酮填料技术参数，特别推出SelectCore HLB-A中药农残专用固相萃取柱（200mg/6mL）产品。相比市面上常规HLB产品，HLB-A可以吸附更多挥发油类成分，并且在除色效果上也较好，从而降低了基质效应。

本次，我们来看看厚朴项目的前处理效果。

★

适用范围

★

本方法参考中国药典2020版2341第五法中的固相萃取法方式二，适用于含挥发油和色素较多的中药材农残检测。

★

实验步骤

★

一

对照品溶液的制备

1.1 混合对照品配制

精密量取禁用农药混合1mL，置20mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用；

1 .2 气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备

取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每1mL含1.0mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每1mL含0.1μg的溶液。

1.3 空白基质溶液的制备

取空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。

1.4 基质混合对照溶液的制备

分别精密量取空白基质溶液1.0mL(6份），置氮吹仪上，40°C 水浴浓缩至约0.6mL，分别加人混合对照品溶液10μL、20 μL、50 μL、100μL、150μL、200μL，加乙腈稀释至lmL，涡旋混匀，即得。

二

供试品溶液的制备

2.1 提取

称取5g厚朴样品，加氯化钠1g，加入50mL乙腈，匀浆处理2分钟，离心后分取上清液，残渣再加50mL乙腈，匀浆处理1分钟，离心后，合并两次提取上清液，减压浓缩至3~5mL，加乙腈定容至10mL，摇匀，待净化。

三

净化

SPE柱：SelectCore HLB-A中药农残专用固相萃取柱（200mg/6mL）
净化1：量取直接提取法制备的供试品溶液3mL，过SelectCore HLB-A中药农残专用固相萃取柱，收集全部净化液，混匀，即得。如净化1方式磺隆类成分回收率较低，可以再结合下面的净化2的回收率数据；
净化2：量取直接提取法制备的供试品溶液5mL，过SelectCore HLB固相萃取柱，收集全部净化液，混匀；
GC/MS/MS测定：取过固相萃取柱后溶液1mL，加入0.3 mL内标溶液，混匀，过PTFE膜，上机分析。
LC/MS/MS测定：取过固相萃取柱后溶液1mL，加入0.3 mL水，混匀，过PTFE膜，上机分析。

四

处理后溶液的颜色比对

厚朴提取液过HLB-A柱

厚朴提取液过HLB柱

由上图可以看出，厚朴提取液经过SelectCore HLB-A中药农残专用柱净化后样品颜色澄清透明，而常规HLB柱净化后样品颜色较深。

五

高效液相色谱-串联质谱法

（岛津 LC-MS 8050）

色谱条件

色谱柱：ChromCore C18-MS Pesticides中药农残专用柱(2.1 ×100 mm，2.6μm)
流动相：
A：0.1%甲酸水溶液（含有5mmol/L甲酸铵）
B：乙腈/0.1%甲酸水溶液（含有5mmol/L 甲酸铵）=95/5
梯度：

时间（min）	流速（mL/min）	流动相A （%）	流动相B （%）
0	0.3	70	30
1	0.3	70	30
12	0.3	0	100
14	0.3	0	100
14.1	0.3	70	30
16	0.3	70	30

流速: 0.3 mL/min
柱温: 40 ℃
进样量: 1 µL

质谱条件

离子源: 电喷雾离子源（Electrospray ionization，ESI）正离子扫描
监测方式：多反应监测（Multiple Reaction Monitoring，MRM）
离子源接口电压：4.5kV
雾化气：氮气3.0L/min
加热气：干燥空气10.0L/min
DL温度：250℃
加热模块温度：400℃
接口温度：300℃
干燥气：N₂ 10 L/min

图1：ChromCore C18-MS Pesticides 色谱柱30种农药标准品（以甲胺磷计0.025 μg/ml）的典型谱图

图2：厚朴空白基质加标的典型谱图（SelectCore HLB净化）

图3：厚朴空白基质加标的典型谱图（SelectCore HLB-A净化）

从以上厚朴基质加标LC/MS/MS图对比来看，HLB-A处理后的加标样品中大部分农残成分的响应值更大，让分析检测结果更为准确。

六

气相色谱-串联质谱法

（岛津 GC-MS 8030）

色谱条件

色谱柱：DB-17MS，30m×0.25mm，0.25μm;
进样口温度：250℃；
升温程序：初始温度为60℃，保持1min；以10℃/min升温至160℃；再以2℃/min升温至230℃，最后以15℃/min升温至300℃，保持6min；
载气：高纯氦气（纯度>99.999%）；
进样方式：不分流进样；
恒压模式：146kPa；
进样量：1μL。

质谱条件

电离方式：电子轰击电离源（EI）；
电离能量：70Ev；
传输线温度：250℃；
离子源温度：250℃；
监测方式：多反应检测模式（MRM）；
溶剂延迟：10.0min。

表1 厚朴中33种农药残留的的测定添加回收结果（%）

农残成分	回收率	农残成分	回收率
甲胺磷	98.1%	甲磺隆	96.1%
甲基对硫磷	80.2%	氯磺隆	90.3%
对硫磷	101.8%	胺苯磺隆	98.9%
久效磷	101.5%	甲拌磷	87.9%
磷胺	99.2%	甲拌磷砜	86.9%
α-六六六	86.7%	甲拌磷亚砜	97.8%
β-六六六	90.9%	甲基异柳磷	93.1%
γ-六六六	89.5%	内吸磷-O	94.5%
δ-六六六	78.0%	内吸磷-S	100.6%
2,4''-滴滴涕	105.3%	克百威	101.2%
4,4''-滴滴滴	87.4%	3-羟基克百威	104.5%
4,4''-滴滴涕	68.1%	涕灭威	80.5%
4,4''-滴滴伊	62.3%	涕灭威砜	92.2%
杀虫脒	85.2%	涕灭威亚砜	111.1%
除草醚	68.2%	灭线磷	79.1%
艾氏剂	72.8%	氯唑磷	101.1%
狄氏剂	79.3%	水胺硫磷	87.2%
苯线磷	97.0%	α-硫丹	93.2%
苯线磷砜	109.3%	β-硫丹	66.2%
苯线磷亚砜	93.1%	硫丹硫酸酯	98.0%
地虫硫磷	98.7%	氟虫腈	96.8%
硫线磷	96.4%	氟虫腈砜	106.6%
蝇毒磷	96.9%	氟虫腈亚砜	99.8%
治螟磷	112.4%	氟甲腈	104.4%
特丁硫磷	84.5%	o,p''-三氯杀螨醇	95.8%
特丁硫磷砜	98.0%	p,p''-三氯杀螨醇	65.3%
特丁硫磷亚砜	96.5%	硫环磷	97.4%
甲基硫环磷	97.6%

注：磺隆类、三氯杀螨醇农残用3mL供试品溶液净化时，回收率偏低，可以另取5mL供试品溶液净化，回收率可以满足药典要求（回收率红色字体代表的是5mL样品过柱）。

七

厚朴过HLB与HLB-A SPE柱的

部分农残基质响应的区别

（左边为HLB，右边为HLB-A）

苯线磷砜

甲拌磷砜

甲基硫环磷

八

实验讨论

通过以上实验数据比对，可以看出SelectCore HLB-A中药农残专用固相萃取柱对厚朴溶液颜色有很好的净化效果，容易干扰检测的挥发油类物质和酚类物质都得到了较好的净化，不仅保护了分析柱和离子源，还极大的消除了由于基质效应带来的检测灵敏度下降等问题。该方法不需要固相萃取柱活化步骤，提取液直接过柱就可以测定，过柱时间花费不到5分钟，不仅操作便捷，对于33种农残成分的峰形均有明显改善。

中药农残相关实验耗材：