【应用分享】中药厚朴的33种农残测定分析

2022-06-16 15:25:47


背景

自2020版中国药典四部2341农药残留量测定法中新增第五法,药材及饮片(植物类)中禁用农药多残留测定法,部分中药检测企业反馈厚朴药材由于含有酚类、挥发油类、生物碱类等,基质效应较为严重,药典规定的4种前处理方法都难以解决。

纳谱分析根据挥发油成分特点,调整亲水亲脂聚乙烯吡咯烷酮填料技术参数,特别推出SelectCore HLB-A中药农残专用固相萃取柱(200mg/6mL)产品。相比市面上常规HLB产品,HLB-A可以吸附更多挥发油类成分,并且在除色效果上也较好,从而降低了基质效应。

本次,我们来看看厚朴项目的前处理效果。

适用范围

本方法参考中国药典2020版2341第五法中的固相萃取法方式二,适用于含挥发油和色素较多的中药材农残检测。

实验步骤

★一

对照品溶液的制备

1.1 混合对照品配制

精密量取禁用农药混合1mL,置20mL量瓶中,加乙腈稀释至刻度,摇匀,备用;

1 .2 气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备

取磷酸三苯酯对照品适量,精密称定,加乙腈溶解并制成每1mL含1.0mg的溶液,即得。精密量取适量,加乙腈制成每1mL含0.1μg的溶液。

1.3 空白基质溶液的制备

取空白基质样品,同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。

1.4 基质混合对照溶液的制备

分别精密量取空白基质溶液1.0mL(6份),置氮吹仪上,40°C 水浴浓缩至约0.6mL,分别加人混合对照品溶液10μL、20 μL、50 μL、100μL、150μL、200μL,加乙腈稀释至lmL,涡旋混匀,即得。

供试品溶液的制备

2.1 提取

称取5g厚朴样品,加氯化钠1g,加入50mL乙腈,匀浆处理2分钟,离心后分取上清液,残渣再加50mL乙腈,匀浆处理1分钟,离心后,合并两次提取上清液,减压浓缩至3~5mL,加乙腈定容至10mL,摇匀,待净化。

三净化

SPE柱:SelectCore HLB-A中药农残专用固相萃取柱(200mg/6mL)

净化1:量取直接提取法制备的供试品溶液3mL,过SelectCore HLB-A中药农残专用固相萃取柱,收集全部净化液,混匀,即得。如净化1方式磺隆类成分回收率较低,可以再结合下面的净化2的回收率数据;

净化2:量取直接提取法制备的供试品溶液5mL,过SelectCore HLB固相萃取柱,收集全部净化液,混匀;

GC/MS/MS测定:取过固相萃取柱后溶液1mL,加入0.3 mL内标溶液,混匀,过PTFE膜,上机分析。

LC/MS/MS测定:取过固相萃取柱后溶液1mL,加入0.3 mL水,混匀,过PTFE膜,上机分析。

处理后溶液的颜色比对

厚朴提取液过HLB-A柱

厚朴提取液过HLB柱

由上图可以看出,厚朴提取液经过SelectCore HLB-A中药农残专用柱净化后样品颜色澄清透明,而常规HLB柱净化后样品颜色较深。

高效液相色谱-串联质谱法

(岛津 LC-MS 8050)

色谱条件

色谱柱:ChromCore C18-MS Pesticides中药农残专用柱(2.1 ×100 mm,2.6μm)

流动相:

A:0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L甲酸铵)

B:乙腈/0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L 甲酸铵)=95/5

梯度:

时间(min)

流速

(mL/min)

流动相A

(%)

流动相B

(%)

0

0.3

70301

0.3

703012

0.3

0

100

14

0.3

0

100

14.1

0.3

703016

0.3

7030

流速: 0.3 mL/min

柱温: 40 ℃

进样量: 1 µL

质谱条件

离子源: 电喷雾离子源(Electrospray ionization,ESI)正离子扫描

监测方式:多反应监测(Multiple Reaction Monitoring,MRM)

离子源接口电压:4.5kV

雾化气:氮气3.0L/min

加热气:干燥空气10.0L/min

DL温度:250℃

加热模块温度:400℃

接口温度:300℃

干燥气:N2 10 L/min

图1:ChromCore C18-MS Pesticides 色谱柱30种农药标准品(以甲胺磷计0.025 μg/ml)的典型谱图

图2:厚朴空白基质加标的典型谱图(SelectCore HLB净化)

图3:厚朴空白基质加标的典型谱图(SelectCore HLB-A净化)

从以上厚朴基质加标LC/MS/MS图对比来看,HLB-A处理后的加标样品中大部分农残成分的响应值更大,让分析检测结果更为准确。

气相色谱-串联质谱法

(岛津 GC-MS 8030)

色谱条件

色谱柱:DB-17MS,30m×0.25mm,0.25μm;

进样口温度:250℃;

升温程序:初始温度为60℃,保持1min;以10℃/min升温至160℃;再以2℃/min升温至230℃,最后以15℃/min升温至300℃,保持6min;

载气:高纯氦气(纯度>99.999%);

进样方式:不分流进样;

恒压模式:146kPa;

进样量:1μL。

质谱条件

电离方式:电子轰击电离源(EI);

电离能量:70Ev;

传输线温度:250℃;

离子源温度:250℃;

监测方式:多反应检测模式(MRM);

溶剂延迟:10.0min。

表1 厚朴中33种农药残留的的测定添加回收结果(%)

农残成分

回收率

农残成分

回收率

甲胺磷

98.1%

甲磺隆

96.1%

甲基对硫磷

80.2%

氯磺隆

90.3%

对硫磷

101.8%

胺苯磺隆

98.9%

久效磷

101.5%

甲拌磷

87.9%

磷胺

99.2%

甲拌磷砜

86.9%

α-六六六

86.7%

甲拌磷亚砜

97.8%

β-六六六

90.9%

甲基异柳磷

93.1%

γ-六六六

89.5%

内吸磷-O

94.5%

δ-六六六

78.0%

内吸磷-S

100.6%

2,4''-滴滴涕

105.3%

克百威

101.2%

4,4''-滴滴滴

87.4%

3-羟基克百威

104.5%

4,4''-滴滴涕

68.1%

涕灭威

80.5%

4,4''-滴滴伊

62.3%

涕灭威砜

92.2%

杀虫脒

85.2%

涕灭威亚砜

111.1%

除草醚

68.2%

灭线磷

79.1%

艾氏剂

72.8%

氯唑磷

101.1%

狄氏剂

79.3%

水胺硫磷

87.2%

苯线磷

97.0%

α-硫丹

93.2%

苯线磷砜

109.3%

β-硫丹

66.2%

苯线磷亚砜

93.1%

硫丹硫酸酯

98.0%

地虫硫磷

98.7%

氟虫腈

96.8%

硫线磷

96.4%

氟虫腈砜

106.6%

蝇毒磷

96.9%

氟虫腈亚砜

99.8%

治螟磷

112.4%

氟甲腈

104.4%

特丁硫磷

84.5%

o,p''-三氯杀螨醇

95.8%

特丁硫磷砜

98.0%

p,p''-三氯杀螨醇

65.3%

特丁硫磷亚砜

96.5%

硫环磷

97.4%

甲基硫环磷

97.6%

__

注:磺隆类、三氯杀螨醇农残用3mL供试品溶液净化时,回收率偏低,可以另取5mL供试品溶液净化,回收率可以满足药典要求(回收率红色字体代表的是5mL样品过柱)。

厚朴过HLB与HLB-A SPE柱的

部分农残基质响应的区别

(左边为HLB,右边为HLB-A)

苯线磷砜

甲拌磷砜

甲基硫环磷

实验讨论

通过以上实验数据比对,可以看出SelectCore HLB-A中药农残专用固相萃取柱对厚朴溶液颜色有很好的净化效果,容易干扰检测的挥发油类物质和酚类物质都得到了较好的净化,不仅保护了分析柱和离子源,还极大的消除了由于基质效应带来的检测灵敏度下降等问题。该方法不需要固相萃取柱活化步骤,提取液直接过柱就可以测定,过柱时间花费不到5分钟,不仅操作便捷,对于33种农残成分的峰形均有明显改善。

中药农残相关实验耗材:

试用方法:


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