2023-08-12 11:58:09 北京东西分析仪器有限公司
导读
军团菌,也叫嗜肺军团菌(LP),一种需氧革兰氏阴性杆菌。人感染后临床表现类似肺炎,由于其与其他病原体引起的肺炎很难区分,因此采用特异、敏感和快速鉴定军团菌的方法尤为重要。东西分析运用多重PCR+核酸质谱技术成功开发出单管检测56种军团菌、15种嗜肺军团菌(非分型)及15种嗜肺军团菌(血清型分型)的应用方案。从而为诊断及后续治疗提供准确的参考信息。
1976年,美国费城退伍军人大会上爆发了一种呼吸道疾病,221人感染,34人死亡。这种呼吸道疾病,是由一种名为“军团菌”的病原体引起。因为感染者大多为军团成员,因此该病被称为军团病或退伍军人症。1978年,国际上正式将该病原体命名为嗜肺军团菌(LP)。
军团病自首次在美国爆发开始,在全球爆发已达50多次,并一直广泛存在于全球各个国家和地区,近几年来,在美国、欧洲、澳大利亚等地都有流行。
嗜肺军团菌属军团杆菌,军团杆菌系需氧革兰氏阴性杆菌,栖息于各种水体水管系统如城市自来水管,住宅、宾馆和工业供水系统,冷却和蒸发冷凝器和空调等为军团菌的主要来源。
军团菌肺炎。潜伏期通常为2-10天或更长,临床表现类似肺炎,症状可表现为寒战、发热、咳嗽乃至咳血。部分感染者还会出现食欲减退、疲劳、头痛、肌肉疼痛、胸痛、腹泻、呕吐等症状,或者神经症状,如意识混乱、认知障碍等,严重者可因呼吸衰竭而导致死亡。
军团菌检测的意义
军团杆菌含59种及3个亚种,约30种与人类疾病相关,其中有24种可引起人类下呼吸道感染。最常见的是嗜肺军团菌(占病例85~90%)引发的军团菌肺炎,非嗜肺军团菌以发热为主有L.micdadei(占5%~10%),再次是L.bozemanae、L.dumoffii和L. longbeachae 。
15个嗜肺军团菌血清型具有较完整的基因序列。其中,嗜肺军团菌血清1型(LP1)与人类疾病关系最密切,其次为血清4型和6型。LP是以肺炎为主要表现的军团菌感染,占社区获得性肺炎(CAP)的1.9%~9%,易重症化,未经有效治疗死亡率可高达5%~30%。嗜肺军团菌是导致重症CAP的3种最常见病原体之一。免疫正常或免疫抑制患者均可患病。老年人易感。军团菌肺炎的宿主危险因素包括糖尿病、晚期肾功能衰竭、合并肿瘤、免疫抑制等状态。
由于军团菌肺炎缺乏典型的临床表现,与其他病原体引起的肺炎很难区分,因此采用特异、敏感和快速鉴定军团菌的方法尤为重要。
目前军团菌检测方法的局限
传统分离培养法
此种方法是诊断肺炎军团菌金标准。然而,苛刻的培养条件、长周转时间(2-14天)和较差的敏感性。
扩增片段长度多态性法、限制性片段长度多态性法和脉冲场凝胶电泳法
不同实验室之间结果不一致、实验操作的标准化较困难。
嗜肺军团菌多基因序列分型方法(SBT)
目前应用最广的嗜肺军团菌序列分型方法,但对嗜肺军团菌的序列分型分辨率不够。
PCR检测试剂
单管不超过10重,并有7个嗜肺军团菌血清型不能完全区分。
微生物飞行时间质谱(蛋白法)
大多数细菌物种都有自己的特异性蛋白质谱图。到目前为止,共有22种军团菌被纳入菌种数据库。但这种方法的缺点是:1)只能在培养菌落后对细菌种类进行识别,对危重患者存在耗时的问题;2)军团菌血清组(serogroup)水平的鉴别与LPS和主要外膜蛋白的差异有关,而不是核糖体蛋白谱。因此,微生物蛋白质谱法无法区分军团菌种中的血清群。
多重PCR+核酸质谱技术进行军团菌快速鉴定的优势
时间短:无需先前的培养分离。对16S rRNA基因386bp部分的军团菌特异性PCR,可在4-8小时内快速完成。
此诊断技术依赖于rRNA序列的非特异性保守区的扩增,可识别所有军团菌亚种。因此,在LP暴发或流行病学调查中具有高的应用价值。
极高的特异性:达95–100%。阳性PCR结果可作为启动军团菌特异性抗生素治疗的信号。
更高的灵敏度:不受病原体活性的限制,允许DNA检测受损或死亡的病原体。
早期筛查:感染早期甚至症状出现之前即可识别阳性病例。
可与抗生素敏感性测试相结合,以指导从经验性抗生素治疗向靶向抗生素治疗的转变。
可区分军团菌种中的血清群。
高通量:每天可检测上千个样本。
东西分析经过多年的开发,运用多重PCR+核酸质谱技术成功开发出单管检测56种军团菌、15种嗜肺军团菌(非分型)及15种嗜肺军团菌(血清型分型)的应用方案。从而为诊断及后续治疗提供准确的参考信息。
Ebio Reader 3700 Plus飞行时间质谱仪
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具备聚类分析功能,可进行T-test等数据分析;
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可根据用户具体需求,进行相应升级,用于疾病蛋白标志物和核酸基因分型的检测。
应用范围广
广泛用于临床、疾控、食品安全、农业、工业、出入境检疫等领域。
往期回顾
BREAK AWAY
核酸质谱之漫话一:什么是核酸质谱
核酸质谱之漫话二:核酸质谱法鉴定结核病及其耐药性
核酸质谱之漫话三:核酸质谱法在人乳头瘤病毒(HPV)分型检测中的应用
关于我们
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