应用分享︱Protein L亲和层析纯化重组抗体Fab片段

2021-07-16 11:56:47, 东曹技术中心东曹（上海）生物科技有限公司

通过基因重组制备的抗体片段（Fab）等低分子抗体，与完整抗体相比，其分子尺寸更小，具有易扩散、渗透性强，以及不会与Fc受体产生相互作用、副作用小等优点。并且，可以利用大肠杆菌、CHO细胞等获得高浓度、高表达的抗体片段，因此在抗体药物、诊断用药的应用上备受关注。

一般来讲，低分子抗体的纯化工艺第一步捕获步骤推荐使用Protein L亲和层析，其后接离子交换层析等进行精纯。本期推文中，我们将介绍几个以Protein L为配基的亲和层析填料分离纯化低分子抗体的相关文献。

抗体的基本结构

分离抗体时使用的亲和层析配基

在近期发表的论文"Three-dimensional chromatography for purification and characterization of antibody fragments and related impurities from Escherichia coli crude extracts"中，使用了东曹的Protein L亲和填料TOYOPEARL AF-rProtein L-650F对大肠杆菌表达的重组低分子抗体Fab及相关杂质进行分离。

期刊：Journal of Chromatography A

论文要点：

• 确立了大肠杆菌表达的重组低分子抗体Fab的纯化方法，并对相关杂质进行了分离和表征。

• 使用Protein L亲和层析、Protein G亲和层析及阳离子交换层析的三步层析法，对4种重组Fab进行纯化，再做质谱分析。

• 识别出纯化产物中的Fab异构体、Fab相关杂质的L链 (LC) 以及L链低分子片段 (LMW)。

• 自动化Fab纯化及分析法的确立，让生产菌株及培养条件的优化变得容易。

在该论文中，作者使用了三种市售Protein L亲和填料进行了分离比较。其中，TOYOPEARL AF-rProtein L-650F有效分离出了目标物质Fab、产品相关杂质的L链和L链低分子片段，相比其他两种Protein L填料表现出了更高的分辨率。

Ref.:C. Schimek et al., Three-dimensional chromatography for purification and characterization of antibody fragments and related impurities from Escherichia coli crude extracts, J. Chromatography A, available on line November 13, 2020, 461702, https://doi.org/10.1016/j.chroma.2020.461702

Protein L亲和层析纯化低分子抗体的文献