2021-06-08 03:13:41 东曹(上海)生物科技有限公司
单克隆抗体药物的质量控制具有挑战性,很大程度在于翻译后修饰的多样性。其中IgG-Fc结构域的糖链异质性因其对单克隆抗体与免疫细胞表面受体蛋白FcγRIIIa的亲和力有重要的影响,而被认为是重要关键质量属性,并进行严格控制。
东曹公司开发的新型亲和色谱柱TSKgel FcR-IIIA-NPR,是以重组FcγRIIIa作为固定相配基,可对N-聚糖结构的抗体进行分析。现在,我们推出了同类亲和制备柱——TSKgel FcR-IIIA-5PW,在选择性上与分析型的TSKgel FcR-IIIA-NPR色谱柱相同。使用该制备柱,可一次性制备和纯化出用于分析糖链结构时所需的抗体样品量。
分离原理
TSKgel FcR-IIIA-NPR色谱柱是将重组FcγRIIIa作为固定相配基,键合到无孔亲水性聚合物基质的填料上。抗体通常可以分离出3个洗脱峰。抗体糖链末端的半乳糖数量越多,在该色谱柱中的保留能力越强。
FcR分析柱与制备柱的参数比较
FcR-IIIA-5PW制备柱的主要用途
可按与分析柱FcR-IIIA-NPR相同的分离选择性进行制备
可制备在质谱分析 (MS)、亲和力 (SPR法)、ADCC活性等糖链分析时足够使用的抗体量 (1~10 mg)
对于使用分析柱无法完全检测出的微量抗体成分,可使用制备柱浓缩后进一步分离分析
在流穿模式下,将单克隆抗体样品与已去除糖链的去糖基化抗体分离去除
应用实例: 抗体成分的制备与分析
使用制备柱在51-67 min期间每隔2 min收集一次样品组分,然后用分析柱FcR-IIIA-NPR进一步分析。该制备柱采用的是多孔填料,粒径为10 μm,所以样品上样量可高于5 mg。
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