柱子出问题了不要慌!TSKgel色谱柱使用中的10大常见问题及解答

2024-02-20 16:42:40 东曹(上海)生物科技有限公司


柱子堵了、柱压超了、保留时间漂移...... 在日常分析工作中你一定碰到过这些色谱柱常见故障。

今天小编选取了用户们在使用TSKgel色谱柱过程中咨询最多的10个问题,并附上了技术工程师给出的专业解答,快来看看有没有你关心的?

Q

色谱柱进一系列样品后出现柱效下降(或者峰型变宽、分岔、分离度下降)怎么处理?能否恢复?

A

上述现象都是色谱柱柱效下降的征兆,样品与流动相在进色谱柱前,一定要经过0.45 μm孔径以下的滤膜过滤,防止柱效下降过快。若已经出现柱效下降,则可以通过冲洗来恢复柱效,冲洗方法参考色谱柱说明书、OCS等文件。

Q

色谱柱的使用寿命是多少?

A

色谱柱的寿命主要取决于进色谱柱的样品以及流动相的成分是否干净,一般样品与流动相进样前必须过滤,流动相建议现配现用。防止有杂质堵住柱子,或者与填料缠上特异性吸附,而导致的寿命缩短。

Q

色谱柱堵,柱压偏高,能否冲洗来降低柱压?

A

常规的由杂质吸附填料引起的色谱柱压力升高,可以通过正向冲洗掉杂质来解决。柱头筛板处如果堵塞导致柱压接近柱压上限的,可以通过反向冲洗色谱柱来解决。注意冲洗时可以将流出液体直接排至废液桶来防止二次污染。

Q

色谱柱长时间平衡后,出峰的保留时间一直飘,是什么原因导致?如何解决?

A

若流速稳定的情况下,可能为流动相未完全混匀,导致流动相的洗脱强度一直在变化既会产生保留时间飘的结果。若流速压力也不稳定,可能是仪器泵液系统产生漏液、故障等问题,需要实际排查。

Q

色谱柱出现不明成分的鬼峰,是什么原因导致?如何解决?

A

首先要确认是否为溶剂与流动相的差异导致的基线波动。若不是,则需要通过排除法(进空白溶剂,换柱子等)来找到杂峰、鬼峰的来源,具体是哪个成分导致的,从而解决此杂峰鬼峰。

Q

基线出现很尖锐的毛刺峰,是什么原因导致的?怎么去除?

A

毛刺峰产生的原因为柱身中进了空气,每个毛刺峰其实就是一个小气泡。要去除柱身中的气泡,可以通过长时间低流速的流动相冲洗来解决。

Q

色谱柱进样后,峰面积值随着进样而变大,怎么处理?

A

样品可能与填料产生非特异性的吸附,包括离子性吸附或者疏水性吸附。可以通过优化流动相条件来增强洗脱强度。若是无法更改方法,则需要通过多进高浓度样品来是填料达到吸附饱和的状态后,出峰才是符合实际情况的。

Q

色谱柱的堵头断在柱身里了,怎么将柱堵取出来?

A

可以用美工刀或者剪刀,将刀刃卡在柱堵上,根据螺纹逆时针旋转出来。

Q

色谱柱的最大压力如何计算?能否超过这个最大压力?

A

说明书上的最大压降(最大压力上限)是指去除仪器系统压力后的色谱柱压力上限。所以首先要通过连接两通来测出一定流速下的仪器系统压力。然后换上色谱柱,此时的压力减去仪器系统压力,即为色谱柱所承受的压力。建议将仪器系统压力+最大压降来作为仪器软件最高耐压预警值,防止色谱柱填料超压塌陷。

Q

样品的溶剂与流动相的不一致是否会有影响?

A

溶剂与流动相的不同会导致不同程度的干扰,差异越大被干扰的程度越严重。因此溶剂与流动相应该完全一致,或者通过稀释来尽量保持接近。

这些常见问题的解答你get了吗?如您还有色谱柱使用方面的其他问题,欢迎随时联系我们!👇

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