SEC-MALS分析技术测定病毒样颗粒(VLPs)的分子量

TSKgel PWXL系列色谱柱的固定相基质为不同孔径的聚甲基丙烯酸酯。图1的蛋白质校准曲线显示了该系列色谱柱的分离范围。大多数VLPs的分子量在1×10⁶ Da以上，因此，G5000PWXL (孔径100 nm)、G6000PWXL (孔径＞100 nm) 和GMPWXL (混合床) 这三款色谱柱都是分析VLPs的理想选择。

图1 PWXL色谱柱的蛋白质校准曲线

本应用中采用了GMPWXL和G5000PWXL色谱柱，分别与LenS3 MALS检测器联用分析细小病毒VLP。RI或UV都可用作浓度检测器。RI配合直角光散射信号 (RALS) 用来测量MW。极小角度(LALS)、直角和极大角度 (HALS) 信号用于角不对称性图的绘制以及测定Rg。分析样品之前，先用BSA校准MALS检测器，然后使用SECview软件处理和分析数据。

GMPWXL色谱柱对细小病毒VLP的SEC-MALS分析结果，揭示其MW约为4×10⁶Da，Rg为12.8 nm。这些结果与该VLP的报告值非常吻合 (Biotech. Prog.34, 1213-1220, 2018)。

图2  GMPWXL混合床色谱柱分析细小病毒VLP和BSA

随后，将细小病毒VLP稀释至64倍，进样10 μL到G5000PWXL色谱柱中。通过MALS检测器的RALS信号，仍可以检测到每毫升约3×10¹⁰个颗粒，由此可见该方法可用于分析低浓度样品或微量样品的检测。

图3 G5000PWXL在0.5 mL/min下通过RALS的检测限

以前，质谱是测定VLP尺寸最常用的方法，但该技术成本高昂且不适合进行频繁的分析。更好的替代方法是使用SEC-MALS来测定MW和Rg，该技术不仅能够进行常规分析，还可以执行过程监控。

TSKgel PWXL系列SEC色谱柱的孔径和分离范围均比较宽，可以有效应对超大分子分析中面临的挑战。而且，此类色谱柱配合超高灵敏度的LenS3 MALS检测器，可以快速、简便地进行MW和Rg的高水平分析。

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