阴离子交换色谱法对PCR产物(DNA)的分离和高纯度制备
2021-05-22 16:04:42, 东曹技术中心 东曹（上海）生物科技有限公司
单分子分析技术和磁镊实验是用来研究核酸、蛋白质、酶反应以及生物分子的单分子水平的动态行为的常用方法。该方法中用到的核酸底物（DNA/RNA）必须是纯度非常高的样品。
在近期发表的一篇关于DNA高纯度制备的研究论文中，层析时使用了无孔阴离子交换填料的色谱柱TSKgel DNA-STAT对DNA（PCR产物等）进行快速分离纯化，来代替以往的分离纯化法。
（论文出自开放获取期刊Open Access）
TSKgel DNA-STAT色谱柱分离纯化DNA时的要点:
• 对PCR产物、寡核苷酸（结合有生物素等）连接的DNA底物进行分离、纯化。
• 在60～90分钟内完成对扩增后的PCR产物或DNA底物的分离、纯化。
• DNA样品的最大载量是100μg。载量为20～50μg时的纯化纯度是95～100%，回收率是70～90%。
DNA（PCR产物）的分离示例
图1: 含有发卡和复制叉的1.2 kb insert DNA的结构
色谱柱对PCR产物（DNA）的吸附较强，盐梯度超过0.5 mol/L NaCl时，样品被洗脱。
图2: 洗脱峰5组分的电泳图
Ref.: Y. Lue and P. Bianco, J. Biological Methods, 2021, Vol. 8(1), e415, DOI:10.1440/jbm.2021.350
核酸分析用离子交换色谱柱的选择:
东曹生命科学提供的核酸分析专用离子交换色谱柱有TSKgel DNA-STAT (强阴离子交换填料) 和TSKgel DNA-NPR (弱阴离子交换填料) 。这两款色谱柱在填料的粒径、离子交换基团和柱尺寸上略有不同。
TSKgel DNA-NPR采用无孔亲水聚合物基质填料，对质粒DNA的三种立体异构体oc、sc/cc、linear可实现高分辨率分析。而TSKgel DNA-STAT在样品载量上更具有优势，如果考虑实验室级别的分离纯化，操作压力较低的TSKgel DNA-STAT则更适合。
参照2020版中国药典分析药用辅料单双硬脂酸甘油酯
TSKgel SW型尺寸排阻色谱柱的清洗再生及保存方法
参考国标GB/T23193-2017 HPLC法测定茶叶中茶氨酸
高效尺寸排阻色谱法测定利拉鲁肽的含量
阴离子交换色谱法快速分析质粒拓扑异构体
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