2021-05-22 16:04:42, 东曹技术中心 东曹(上海)生物科技有限公司
单分子分析技术和磁镊实验是用来研究核酸、蛋白质、酶反应以及生物分子的单分子水平的动态行为的常用方法。该方法中用到的核酸底物(DNA/RNA)必须是纯度非常高的样品。
在近期发表的一篇关于DNA高纯度制备的研究论文中,层析时使用了无孔阴离子交换填料的色谱柱TSKgel DNA-STAT对DNA(PCR产物等)进行快速分离纯化,来代替以往的分离纯化法。
(论文出自开放获取期刊Open Access)
01
TSKgel DNA-STAT色谱柱分离纯化DNA时的要点:
• 对PCR产物、寡核苷酸(结合有生物素等)连接的DNA底物进行分离、纯化。
• 在60~90分钟内完成对扩增后的PCR产物或DNA底物的分离、纯化。
• DNA样品的最大载量是100μg。载量为20~50μg时的纯化纯度是95~100%,回收率是70~90%。
02
DNA(PCR产物)的分离示例
图1: 含有发卡和复制叉的1.2 kb insert DNA的结构
色谱柱对PCR产物(DNA)的吸附较强,盐梯度超过0.5 mol/L NaCl时,样品被洗脱。
图2: 洗脱峰5组分的电泳图
Ref.: Y. Lue and P. Bianco, J. Biological Methods, 2021, Vol. 8(1), e415, DOI:10.1440/jbm.2021.350
03
核酸分析用离子交换色谱柱的选择:
东曹生命科学提供的核酸分析专用离子交换色谱柱有TSKgel DNA-STAT (强阴离子交换填料) 和TSKgel DNA-NPR (弱阴离子交换填料) 。这两款色谱柱在填料的粒径、离子交换基团和柱尺寸上略有不同。
TSKgel DNA-NPR采用无孔亲水聚合物基质填料,对质粒DNA的三种立体异构体oc、sc/cc、linear可实现高分辨率分析。而TSKgel DNA-STAT在样品载量上更具有优势,如果考虑实验室级别的分离纯化,操作压力较低的TSKgel DNA-STAT则更适合。
参照2020版中国药典分析药用辅料单双硬脂酸甘油酯TSKgel SW型尺寸排阻色谱柱的清洗再生及保存方法参考国标GB/T23193-2017 HPLC法测定茶叶中茶氨酸高效尺寸排阻色谱法测定利拉鲁肽的含量阴离子交换色谱法快速分析质粒拓扑异构体
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