Dr.赛流式小课堂 | 流式补偿救星：揭秘补偿微球的超能力！

2025-02-21 16:15:58, 赛默飞生命科学赛默飞世尔科技生命科学产品

什么是补偿微球？

在进行传统流式多色分析时，由于荧光染料的发射光谱重叠，不同通道的检测器可能会检测到来自其他染料的荧光信号，造成荧光溢漏（Fluorescence Spillover），通常我们会使用样品单染管来调节补偿校正信号。但实际操作中，我们可能会遇到用样本标记的单染管表达丰度较弱，甚至没有阳性，这个时候补偿很难调节，我们就需要使用到补偿微球。

图1：荧光补偿是通过数学算法对流式细胞数据进行校正来去除光谱的重叠。

补偿微球含有两种大小均匀的聚苯乙烯微球，一种是阳性补偿微球（positive beads）能结合荧光偶联抗体/染料，另一种是阴性补偿微球（negative beads）不能结合荧光偶联抗体/染料，当两种微球混合后能够产生模拟样品细胞群的阳性和阴性荧光群体。

图2：补偿微球染色示意图

例如图片3所示，当使用小鼠原代脾脏细胞制备Ki-67单染管时，阴性和阳性细胞群连在一起，没有明显的双峰分布，无法圈出阳性群做补偿调节；而当使用Invitrogen UltraComp eBeads Plus 补偿微球制备Ki-67单染管时，阴性和阳性群分群清晰（50%阳性和50%阴性），易于圈选阳性群调节补偿。

图3：Ki-67 antibody staining on cells (上图)；

Ki-67 antibody staining on UltraComp eBeads Plus (下图)

选择细胞样本or补偿微球？

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流式荧光补偿微球产品选择指南

Invitrogen抗体补偿微球产品

（点击查看大图）

常见Question & Answer

问

如何选择合适的抗体补偿微球？

答

选择合适的抗体补偿微球时，请注意以下几点：

确定流式荧光抗体的宿主和亚型，根据补偿微球的抗体反应性选择；
了解补偿微球的激光兼容性，根据流式仪器的配置选择合适的补偿微球。

问

能否使用抗体补偿微球染 LIVE/DEAD 可固定死活染料做补偿单染管呢？

答

不能。对于 LIVE/DEAD 可固定死活染料这类胺反应性染色剂，建议您使用我司的 ArC 胺反应性补偿珠试剂盒（货号 A10346 和 A10628）进行补偿对照。试剂盒包括两种特别修饰的聚苯乙烯微球：

ArC 反应性微珠（组分 A）：可结合任何胺反应性染料，提供阳性信号。
ArC 阴性微珠（组分 B）：无反应性，提供阴性信号。

详见如下产品表：

问

我待检测的细胞样本表达了荧光蛋白，想要设置补偿单染管，可以选择什么补偿微球产品呢？

答

在使用荧光蛋白表达样品时，建议选择 BrightComp eBeads™ 补偿微珠设置补偿单染管。该试剂盒包含阴性微球和阳性微球，其中阳性微球经过染色，在 GFP、mCherry、RFP、CFP 和 YFP 上都表现出三种强度的荧光特征。这些微球能够轻松完成补偿调节，确保实验结果的准确性。详见如下产品表：

问

补偿微球的染色步骤要和细胞样本染色步骤一致吗？

答

用补偿微球做的单色管需要与细胞经历相同的染色步骤，包括固定和破膜试剂的处理，以确保微球标记的荧光素与细胞标记的荧光素光谱一致。

问

我使用补偿微球制备的单染管流式上机后，为什么在FSC/SSC中出现了多个细胞群？

答

由于材质原因，补偿微球易聚集，FSC/SSC出现多群可能是由于微球聚集造成的，因此使用微球之前要充分涡旋（是否能涡旋请参考产品说明书），且注意微球储存过程不能冷冻。

流式细胞术是重要的细胞分析方法学，赛默飞世尔科技的Gibco、Invitrogen和Thermo Scientific产品品牌可提供从流式仪器、抗体试剂到丰富资源的流式整体解决方案。其中Invitrogen eBioscience陪伴着每一代流式科学家和技术人员获得成果、共同成长，这些年来我们一起见证以Anti-FoxP3为代表的流式抗体深受喜爱、更多种类的流式荧光染料欣然上市以及赛默飞科学家们的十年如一日技术陪伴，现在有着更丰富的产品和工具，满足高校研究院、生物技术公司、药企等从早期基础研究到临床转化和生产等不同阶段的需求，加速生命科学行业的进程发展。