靛蓝分析回收率不稳定？层层排查探索真相

（图片来源：baotu）

靛蓝是食品生产中常用的合成着色剂之一，关于靛蓝的分析测试，有实验室人员反馈回收率做不好，时高时低，让我们一起来探索真相！

许多着色剂的中文俗称是一样的，我们在选择标准品的时候容易弄错。比如CAS：860-22-0与CAS：482-89-3的着色剂，我们均习惯的称之为“靛蓝”，但两者结构式是不一样的（见下图）。

● CAS：860-22-0的靛蓝可以溶于水；

● CAS：482-89-3的靛蓝不溶于水。

本文采用的靛蓝标准品是CAS：860-22-0。

实验过程

SPE净化步骤

SPE柱：PWAX固相萃取柱（150mg/6mL）。

活化：5mL 甲醇，5mL 10%甲酸水，弃去；

上样：待净化液全部上样，弃去；

淋洗：5mL甲醇(润洗离心管)，弃去，抽干；

洗脱：8mL 15%氨水甲醇溶液，收集于15mL离心管中，抽干；

45℃氮吹至 500μL左右，用水定容至5mL，过0.22μm PTFE过滤头，上HPLC检测。

色谱条件

色谱柱：月旭Ultimate^®XB-C18，4.6*250mm，5μm。

流动相：乙酸铵溶液-甲醇=详见洗脱梯度表；

流速：1.0mL/min；

柱温：30℃；

检测波长：610nm；

进样量：10μL。

洗脱梯度表

实验结果：

靛蓝的加标回收率在60-100%，或者干脆不出峰。不同实验时间、不同实验员测试的结果不尽相同。

（图源：soogif）

原因分析

1. “SPE方法”问题排查

• 分别收集SPE上样、淋洗，洗脱的溶液均未检测到靛蓝；

• 换用不同材质的容器，塑料容器和玻璃容器收集过柱溶液，排查盛放容器是否对目标物有影响，结果并无差异；

• 经过对SPE方法的分析，回收率有高的情况，可见SPE方法没有问题。

2. “标准品存放条件”问题排查

配置1000ppm的靛蓝标准储备溶液，室温存放一段时间，肉眼观察其变化情况。溶液颜色最开始为蓝色，然后颜色不断变化，放置三周后溶液变成黄色并一直保持这个颜色，可见靛蓝水溶液在室温存放不稳定。分析导致其变质的原因可能有温度、时间、光照、氧气等因素。

500ppm靛蓝水溶液

方法改进：

每次实验前均取固体靛蓝标品，现用现配，在实验过程中避光操作，实验前处理过程控制在1天之内，样品处理完后，立即上机测试，结果靛蓝的回收率可以达到90-95%。

建议：

首先，标准品不要买错，以CAS号为准。

其次，靛蓝（CAS:860-22-0）性质很不稳定，不耐光和热，实验中靛蓝回收率忽高忽低不稳定的原因主要是标准品发生了降解或者是在前处理过程中降解，为了避免靛蓝的损失，每次实验需要用固体的靛蓝标品，现用现配。

在整个实验过程中避光操作，合理安排前处理时间，尽快完成前处理，样品处理完后，立即上机测试。

产品信息

货号	名称	规格
00201-31043	液相色谱柱	Ultimate^®XB-C18， 4.6*250mm，5μm
00577-20043	固相萃取柱	Welchrom^® PWAX 弱阴离子交换萃取柱， 150mg/6mL
00837-05006	50mL螺口尖底离心管	Welchrom^® 一次性离心管，平盖，锥形底RCF12000xg，袋装，未灭菌，50mL， 50/包
00837-05002	15mL螺口尖底离心管	Welchrom^® 一次性离心管，平盖，锥形底，RCF12000xg，袋装，未灭菌，15mL， 50/包
00824-31001	固相萃取装置	Welch 固相萃取装置 12位方缸