抽丝剥茧探案六： 基线不佳，你可能疏忽哪些原因？

色谱图：是指以检测器输出的信号对时间作图，所形成的曲线图，也称为色谱流出曲线，曲线上凸起部分即为色谱峰。

色谱基线：在实验操作条件下，色谱柱后仅有流动相进入检测器时的流出曲线称为基线，稳定的基线应该是一条水平直线。

基线噪声：基线噪声是指色谱图中未加入试样时或基线扫描过程中出现的连续的或周期性的电信号或峰。

基线漂移：基线随时间定向的缓慢变化。

基线噪音

1、流动相脱气不完全，泵、管路、色谱柱或检测器中有空气；流动相互溶性不好，混合不完全。

2、流动相，色谱柱或检测器污染。

3、系统有漏液。

4、检测器光源能量不足。

5、使用紫外检测器时，选择的检测波长在溶剂紫外吸收截止波长附近；数据采集频率过高。

基线呈现规律的锯齿状，采集压力线及查看压力显示会发现压力线较粗，并且压力波动较大，这种情况一般是由以下原因引起的：

1、泵头中存在空气，将溶剂脱气，重新灌注泵。

2、单向阀问题，超声清洗单向阀芯或更换阀芯。

3、柱塞密封或柱塞杆问题，清洗或更换柱塞密封或柱塞杆。

4、混合不充分问题，更换一个体积更大的混合器。

5、检测器背压不足，进气泡，流通池出口管路需预留足够长度，提供充足背压。

6、静电干扰，检查接地。

脉动较大的基线问题，这种一般是柱塞杆密封问题导致的，需要对应的进行柱塞密封或柱塞杆进行清洗维护，甚至是更换对应的组件。

未进样状态下，基线杂乱，一般是系统污染，需彻底清洗系统。

基线漂移

1、一般是柱温影响，对于部分检测器，尤其是示差折光、电导检测器或者高灵敏度的紫外检测器对温度影响比较敏感。控制柱温、流动相温度、流通池温度、室温，必要时使用柱后热交换装置。

2、流动相不均匀或污染，这个原因导致的基线漂移通常是不规则的，实验过程中应采用HPLC级别的溶剂或者高纯度的盐或添加剂。

3、检测器流通池污染或有气泡，采用极性强的溶剂（比如甲醇）对检测池进行冲洗。

4、检测器出口管线拧得过紧，这会导致流通池的背压太高，导致流通池可能产生裂纹，从而导致基线的升高。

5、色谱柱平衡不充分，按照不同色谱柱的出厂说明书充分平衡色谱柱。

6、样品物质的强保留属性，导致峰的严重展宽，从而表现为基线的抬升。

第二步排查：

更换新色谱柱，重新平衡色谱柱，进样，峰形正常，基线波动依然较大。

第三步排查：

可能流通池被污染，先使用温纯水冲洗2h，后使用甲醇冲洗2h，测试后发现基线恢复正常，进样后基线与峰形均正常，问题得到解决。

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