2024-05-07 11:18:08, 分离纯化部 月旭科技(上海)股份有限公司
(图片来源:baotu)
细胞色素C是包括多种能够传递电子的含铁蛋白质的总称,蛋白质部分由104个左右的氨基酸残基组成,其中赖氨酸含量较高,为碱性蛋白。它广泛存在于各种动物、植物组织和微生物中。在需氧最多的组织如心肌及酵母细胞中含量丰富。
(图片来源:wangluo)
细胞色素C在临床上应用十分广泛,比如一氧化碳中毒的患者、心肌缺氧的患者都可以通过注射细胞色素C来得到及时的抢救。同时细胞色素C的提取工艺也非常的简单,利用其易溶于酸的特性,通过简单的吸附法就能有效的得到细胞色素C提取物。原料的来源也非常多,动物的心脏就含有非常丰富的细胞色素C。
细胞色素C层析纯化方案:
本实验所使用的纯化填料为CM Tanrose 6FF,是由月旭科技研发生产的一款高流速琼脂糖基架弱阳离子交换介质填料。以猪心脏为原材料,通过前处理提取出细胞色素C粗品,再使用CM Tanrose 6FF填料进行纯化,最终纯度可达到80%以上,收率可达到90%左右。
层析条件:
填料:CM Tanrose 6FF
样品:新鲜猪心脏中提取的粗品
程序运行:
缓冲液A平衡柱子,6CV,2mL/min
↓
缓冲液B预先充满管路,2CV,2mL/min
↓
上样环上样,1mL/min
↓
缓冲液A后平衡,2CV,1mL/min
↓
缓冲液B线性梯度洗脱,
0-100%B,10cv,1mL/min
CM离子交换层析结果分析
图1:细胞色素C经CM离子交换层析纯化图谱
对洗脱液进行SDS-PAGE电泳跑胶,通过凝胶成像仪分析结果如下:
图2:凝胶成像仪分析图
将多次平行实验的数据截取,数据如下:
图3:CM Tanrose 6FF洗脱液
(目标蛋白纯度81.5%)
图4:CM Tanrose 6FF洗脱液
(目标蛋白纯度86.1%)
结论
通过对新鲜猪心脏进行处理,得到粗提物——细胞色素C粗品,使用CM Tanrose 6FF填料进行分离纯化。纯化后其纯度得到很大提升,较好的将杂蛋白与目标蛋白实现分离。后续通过SDS-PAGE,得到清晰的电泳胶,凝胶成像仪分析后的纯度数据,符合纯化要求。
(
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作者:路畅
排版:赵林
审核:栾建明
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