2023-07-28 13:44:36 东曹(上海)生物科技有限公司
新冠疫情把病毒变成了每个人共同的一段切身经历,尽管如此,我们仍需记住,并非所有病毒都是危险的。事实上,一些病毒能够起到输送生物治疗剂的作用。在进行基因治疗时常会用到这项技术,可以通过修改患者基因达到治疗或治愈疾病的效果。基因治疗主要分为以下几种方式:通过专业技术人员实现正常基因的拷贝与致病基因的替换,使功能异常基因失活,或向体内引入新基因或修饰基因。
选择方案三时,病毒载体——特别是使用AAV的病毒载体,可以说是极为有用。首先,由于其固有的自然设计,病毒载体进入细胞的效率极高。其次,该病毒载体的复制需依赖于与其他病毒的共感染,这点使其不具有致病性。最后,至少有12种不同人血清型AAV,其各自感染的细胞类型不同,使其可用于靶向特定类型细胞的治疗。
AAV载体是由蛋白质和DNA组成的有着精确构造的复杂生物分子组合。理想情况下,科学家可以造出含预期单链DNA的细胞衣壳。但是,系统并不完美。存在产生无任何DNA的空衣壳及部分填充的衣壳的风险,这些不良衣壳可能会导致治疗无效或疗效降低。因此,开发生产及测量AAV衣壳的可靠方法是非常需要的,包括但不限于测量DNA属性(如基因组完整性、AAV DNA修饰和衣壳中存在的部分DNA)以及衣壳自身属性(如衣壳的特性、病毒蛋白占比、聚集体等)。这正是SEC-MALS可以发挥作用的地方,特别是在给药试验中基因组滴度测定及聚集体或空壳、部分和完整AAV测定方面。
要了解SEC-MALS法的威力,首先要了解光散射分析的优势和过程。光束照射到溶液中的分子时,分子内会产生振荡偶极子,此时光会向各个方向重新射出。一般来说,光的射出量与分子量有关;但是,散射光的强度随其散射方向不同而有所差异。为了收集到最精确的分子测量数据,应从多个不同角度来测量散射光。
东曹LenS3 MALS检测器从极小角度(10度)、极大角度(170度)和直角,三角度散射光检测模式,来计算分子大小。根据分子是大还是小,可以调用不同的角度。检测器单次运行即可获得三个关键质量属性的量化数据:颗粒浓度、衣壳含量和聚集度。典型的仪器配置如图1所示。事实上,该方法的主要优势是其所需的系统改造最小也最简单。
图1. HPLC/UHPLC-UV-MALS典型配置
图2. AAV分析用TSKgel SEC色谱柱
图3. 使用LenS3检测时灵敏度更高
图4. 测定完整/空衣壳的比率
AAV下游工艺的主要挑战之一是有效分离所需的完整AAV与纯化后的残留杂质。如果将SEC-MALS法用于未纯化样品,能否应对这一挑战?
SEC-MALS也可用于分析AAV以外的其他病毒。科学家总能想出新的基因递送策略,东曹生命科学也总有相应策略与之应对。对小病毒颗粒研究得出了与AAV的试验相似的结果,并实现了高效分离。东曹生命科学对这些病毒颗粒进行了高效分离和分子量测定,通过质量单位与能量换算得出12.8 nm的结果——与该病毒颗粒的报告值完美匹配。简而言之,SEC-MALS法不仅可应用于AAV,也为其他各种应用创造了无限可能。
03-14 NanoTemper
ICP-MS技术漫谈V--碰撞/反应池CCT技术之于icpTOF:复杂基体高时间分辨率测量中充分非必要之选03-13 Marcel Burger等
媒体报道 | 亦庄融媒采访卓立汉光:如何推动产品迭代促进订单增长?03-13 光电行业都会关注
邀请函 | 卓立汉光亮相2024慕尼黑光博会,3月20日上海见!03-13 光电行业都会关注
解决方案 | 可见近红外光纤光谱仪在透射率应用中的示例03-13 奥谱天成
热点应用 | 复旦大学张凡团队开发具有高亮度和长血液循环时间的近红外二区刷状大分子荧光探针用于肾脏疾病检测03-13
体外诊断试剂量值溯源的实施方案及关键要素(上篇)03-13
【知识库 · 转载】晶型定性定量研究知多少?03-13
【两会热点】快速响应国家号召,支持医药行业分析设备以旧换新03-13
【热点应用】高数据质量的XRD指导新药研发和制剂晶型研究03-13 陈丽
XRD软件应用技巧 | XRDML数据格式转换03-13 朱晓东
国仪量子携手清华磁共振实验室为您答疑解惑!顺磁小课堂第42期03-13 CIQTEK
深入断裂“现场”!扫描电镜在金属断口分析中的应用03-13 CIQTEK
热辣滚烫!诺力昂庆祝国际妇女节03-13 Nouryon
干货!补血良药“当归”的农药残留检测03-13 得泰仪器Detelogy
酶标仪怎么选?看这篇就够了03-13 安捷伦科技
精细分型 伴您前行——免疫精细分型11项03-13 安捷伦细胞分析
一个视频带您了解安捷伦Seahorse XF 技术03-13
肿瘤代谢系列讲座 | 肿瘤代谢与免疫专场03-13 安捷伦细胞分析
售后直播间 | Trouble Shooting 之酶标仪与液体处理03-13 安捷伦细胞分析