SEC分析中样品吸附的改善——流动相及色谱柱应对策略

2023-04-17 19:53:41 东曹（上海）生物科技有限公司


使用尺寸排阻色谱法（SEC）分离生物大分子时，有时会发生因样品吸附在色谱柱上，而导致色谱图变化或出现异常洗脱峰的现象。该现象往往是样品的疏水性和静电作用引起的，有时在分离时反映为色谱柱间差异。

为解决这类问题，可以通过向流动相中添加各种试剂来抑制吸附，以实现正常的SEC分离。

本篇推送中我们汇总了可以抑制样品与色谱柱之间相互作用的试剂种类，并归纳了不同SEC流动相改善色谱分离效果的示例。希望能给大家的分析工作提供参考。












01
可添加试剂的种类及效果


02
不同SEC流动相的改善示例

下表是按照样品分类归纳了SEC流动相对样品吸附、相互作用的改善示例。虽然在出现静电相互作用时，向流动相中添加盐便可抑制，在发生疏水相互作用时，选择哪种添加试剂是非常重要的。

另外，由于添加试剂可能会导致生物大分子的结构发生显著变化、失活或变性，因此需要特别注意。


03
色谱柱的老化处理

在SEC色谱柱的使用初期，常会出现蛋白质多聚体等物质吸附于色谱柱的现象。防止该现象的对策是可以对色谱柱进行老化处理（预处理）。


01
色谱柱老化处理示例1：

将目标样品（相对含有较多多聚体的情况）重复进样5～10次，然后进行清洗。
02
色谱柱老化处理示例2：

将市售的人血清（10 g/L、过滤样品）重复进样5～10次，然后进行清洗。

请在色谱柱的老化处理后分析目标样品，确认多聚体等物质的洗脱峰面积已经稳定。不过，色谱柱的老化处理是最后的办法，建议大家尽量去找到合适的流动相以抑制吸附。


写在最后

关于生物大分子SEC分析中流动相的优化方法、改善分离相关的文献和技术资料，我们已经整理出来并附上了链接，请点击“阅读原文”进行查阅。




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