Blood | 宸安生物流式质谱助力激素抵抗型急性移植物抗宿主病（SR-aGvHD）的生物标志物研究

异基因造血干细胞移植（alloHCT）是治疗血液系统恶性肿瘤的核心手段，而移植物抗宿主病（GvHD）是限制移植疗效的主要并发症，也是移植后早期死亡的重要诱因。糖皮质激素是急性移植物抗宿主病（aGvHD）的一线治疗药物，但30%-50%的Ⅱ-Ⅳ度aGvHD患者会进展为激素抵抗型aGvHD（SR-aGvHD），该类患者预后极差，长期生存率显著降低。目前，临床亟需可靠的生物标志物，以便进行早期风险识别和分层干预。

近期，上海血液学研究所/瑞金医院血液科胡晓霞主任医师团队联合多家单位在《Blood》发表题为“CD28⁺ CD8⁺ Tem cells with a STAT1-dependent glucocorticoid receptor deficit contribute to steroid-refractory acute GvHD”的研究论文，研究团队首次从多组学整合（流式质谱、单细胞测序等）和多中心验证两个层面，系统提出了“炎症因子–STAT1–GR–CD28⁺ CD8⁺ 效应记忆T细胞（Tem）” 这一与SR-aGvHD密切相关的关键病理轴。在转化应用层面，团队在多中心队列验证中发现中性粒细胞植入后72小时内外周血CD28⁺ CD8⁺ Tem绝对计数可作为预测SR-aGvHD风险的关键生物标志物，为aGvHD患者提供更前移、更精准的分层管理和通路靶向干预策略。

临床与免疫学特征研究

首先，研究人员使用了宸安生物流式质谱技术对62例alloHCT受者样本进行检测，样本分为无aGvHD、激素敏感型aGvHD（SS-aGvHD）与SR-aGvHD组，另设置6例健康供者作为对照。高维流式质谱分析采用37种标志物检测方案，将免疫细胞划分为32个亚群（图1B、1C）。分析结果显示，SR-aGvHD患者发病期存在两种效应起始T细胞亚群的显著扩增，分别为终末分化CD28⁺ CD8⁺ Tem细胞与CXCR3⁺ CD8⁺初始T（Tn）细胞（图1D）。SR-aGvHD患者的CD28⁺ CD8⁺ Tem细胞呈活化与细胞因子应答表型，高表达CXCR6、IL2RB、IL27RA、CD28、ICOS与HLA-DR（图1E）。Th1样CD4⁺ 记忆T（Tm）细胞、浆细胞样树突状细胞（pDC）与pDC样非经典单核细胞（NCM），在SR-aGvHD与SS-aGvHD患者中均出现改变，属于aGvHD的共性免疫特征，而非激素耐药特异性改变。此外，CD28⁺ CD8⁺ Tem细胞与CXCR3⁺ CD8⁺ Tn细胞的丰度，在Ⅲ-Ⅳ度重度aGvHD患者中显著高于Ⅰ-Ⅱ度患者。免疫亚群相关性分析显示，CD28⁺ CD8⁺ Tem细胞与Th1样CD4⁺ Tm细胞呈正相关，NCM与pDC相互正相关，且二者与Th1样CD4⁺ Tm细胞呈负相关。

图1 多组学研究设计及免疫特征分析

CD28⁺ CD8⁺ Tem的临床预测价值

研究者为进一步验证CD28⁺ CD8⁺ Tem的临床预测价值，纳入383例alloHCT受者的多中心流式队列，样本于中性粒细胞植入后72小时内采集（图2A）。训练集分析显示，后续发生SR-aGvHD的患者NCM比例降低，CD8⁺ Tem细胞绝对计数显著升高（图2B）。CD8⁺ T细胞亚群分析发现，仅CD8⁺ T细胞、CD8⁺ Tem细胞与CD4+ Tem细胞的相对比例，在SR-aGvHD患者中显著升高（图2C）。表达CD28、CD27、CD57、PD-1的活化CD8⁺ Tem亚群，也出现显著扩增（图2D）。受试者工作特征（ROC）分析确定了CD28⁺ CD8⁺ Tem细胞绝对计数的临界值为8.56个/μL，高于该临界值的患者SR-aGvHD累积发生率（CIF）显著高于临界值以下患者（图2F）。在重复验证组中，高CD28⁺ CD8⁺ Tem细胞计数患者的SR-aGvHD累积发生率同样显著升高（图2G、2H）。在不同预防方案、发病时间、疾病分级与发病部位的亚组中，SR-aGvHD患者的CD28⁺ CD8⁺ Tem细胞计数均显著高于SS-aGvHD患者。多因素校正后，CD28⁺ CD8⁺ Tem细胞丰度仍可独立预测SR-aGvHD发生。

图2 CD28+ CD8+ Tem细胞丰度升高可预测SR-aGvHD

同时，研究还发现SR-aGvHD患者存在以IL-2、IL-27和IFN-γ为特征的促炎性细胞因子环境与CD28⁺ CD8⁺ Tem细胞扩增呈正相关；SR-aGvHD患者的CD8⁺ Tem细胞GR表达下降，GR通路活性减弱。JAK抑制剂可逆转细胞因子诱导的激素耐药表型，芦可替尼治疗有效的SR-aGvHD患者，STAT1活化下降、GR表达恢复，扩增的CD8⁺ Tem细胞群收缩。

综上，该研究明确SR-aGvHD患者在激素治疗前存在特异性免疫紊乱，核心为CD28⁺ CD8⁺ Tem细胞扩增及STAT1依赖性GR信号减弱。外周血CD28⁺ CD8⁺ Tem细胞计数可作为SR-aGvHD早期风险分层的实用生物标志物，为临床精准靶向治疗提供关键理论与实践依据。

流式质谱应用

在流式质谱的检测中，研究团队使用了宸安生物自主研发的Starion 星瀚®单细胞流式质谱系统、37标志物定制检测方案和数据分析方法。Starion 星瀚®流式质谱系统可以实现对大量样品的高通量流式分析。宸安生物向研究和临床人员提供包括硬件、配套试剂和高维数据可视化分析套件的完整解决方案，共同推进流式质谱在血液系统疾病、肿瘤免疫、新生抗原等方向的应用。

检测方案

文献

Pan, Z., Deng, Y., Huang, J., Bian, H., Chen, Y., Huang, A., Jiang, C., Wang, L., Zhang, Z., Lu, H., Li, S., Yin, T., Yu, S., Zhu, J., Zhao, W. L., Wang, J., Ji, J., Xu, Y., Cheng, H., Chen, J., … Hu, X. (2026). CD28⁺ CD8⁺ Tem cells with a STAT1-dependent glucocorticoid receptor deficit contribute to steroid-refractory acute GVHD. Blood, blood.2025032587. 

Advance online publication. https://doi.org/10.1182/blood.2025032587

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