Acta Pharmaceutica Sinica B丨宸安生物流式质谱助力三叶青外泌体样纳米颗粒重塑肠-肿瘤轴激活抗肿瘤免疫研究

三阴性乳腺癌是乳腺癌中侵袭性最强、治疗难度最高的亚型，具备复发率高、易早期转移、预后极差的核心特点，同时属于典型的免疫“冷”肿瘤。肠道-肿瘤免疫轴作为系统性抗肿瘤免疫调控核心通路，近年备受关注。重塑肠道免疫稳态、恢复菌群平衡等手段，能有效提升实体瘤免疫治疗效果，但目前兼具肠道与肿瘤免疫双重调控作用、且可非侵入递送的治疗手段仍十分匮乏。

传统中医药在肿瘤治疗中应用广泛，三叶青作为常用抗肿瘤草药，已被临床前研究证实具备抑制肿瘤增殖、调节炎症反应的活性，但其调控全身及肿瘤相关免疫的具体机制，尤其是对肠道-肿瘤免疫轴的潜在作用，尚未得到深入探究；同时，口服生物利用度低、缺乏靶向递送体系、潜在全身毒性等问题，严重限制了其三叶青的临床转化应用，因此亟需创新递送策略，并深入挖掘其免疫调控机制。

近日，宸安生物合作团队浙江省人民医院吕振晔、陈玉平、牟晓洲团队和北京化工大学刘惠玉团队基于三叶青研发了来源类外泌体纳米颗粒（TNPs）（图1）。该纳米囊泡既保留了三叶青核心活性成分，又提升了胃肠道稳定性，可被宿主免疫细胞靶向摄取；与传统提取物不同，TNPs无直接细胞毒性，可作为特异性免疫调节剂，同步重塑肠道与肿瘤双重免疫微环境，为突破三阴性乳腺癌免疫治疗困境提供了新方向。该研究以"Orally delivered exosome-like nanoparticles from Tetrastigma hemsleyanum Diels & Gilg remodel the gut–tumor immune axis to activate antitumor immunity"为题发表在《Acta Pharmaceutica Sinica B》上。

图1 TNPs制备流程及作用机制示意图

在对TNPs重塑后的肠道免疫微环境探究中，研究团队使用了宸安生物流式质谱技术对CD45⁺的免疫细胞亚群进行了全面表征（图2），通过对比TNPs组和PBS组，证实了TNPs组CD45⁺细胞亚群中CD4、CD11c及MHC-II的表达强度增加，表明活化辅助性T细胞与专职抗原呈递细胞的存在显著增强。为TNPs可被肠道免疫细胞有效摄取，并激活Th1型免疫应答，同时促进肠道淋巴结中树突状细胞的成熟的结论提供了关键证据。

图2 TNPs激活肠道的免疫反应

随后，研究团队还使用流式质谱绘制了口服TNPs后的乳腺癌免疫微环境图谱（图3），发现口服TNPs显著增加了肿瘤组织中CD4⁺和CD8⁺ T细胞的浸润，尤其是具有杀伤功能的IFN-γ⁺ T细胞亚群；促进了肿瘤相关巨噬细胞从促肿瘤的M2型向抗肿瘤的M1型转化，并减少免疫抑制性的调节性T细胞；使原本“冷”的肿瘤微环境转变为免疫激活的“热”状态。

图3 TNPs重塑肿瘤免疫微环境，激活抗肿瘤免疫应答

本研究证实，TNPs作为一种安全有效的植物源纳米药物，能够通过肠道-肿瘤免疫轴重塑机体免疫景观。TNPs通过增强Th1型免疫应答、促进抗原呈递、重塑肠道菌群以及抑制PD-L1介导的免疫逃逸，激发出强效的抗肿瘤免疫反应，且不具有直接细胞毒性或系统性毒性。更重要的是，在免疫难治的三阴性乳腺癌模型中，TNPs与抗PD-L1免疫检查点抑制剂联用，显著增强了治疗效果。凭借其多靶点的免疫调节作用，TNPs有望成为一个兼具免疫增强、免疫治疗增敏及肿瘤长期预防潜力的多功能平台。该研究凸显了将传统草药与现代纳米医学及肿瘤免疫治疗相结合的口服免疫营养策略的临床转化潜力。

流式质谱应用

在流式质谱的检测中，研究团队使用了宸安生物自主研发的Lunarion宵晖^®单细胞流式质谱系统、小鼠肿瘤免疫分析用抗体（27指标）(PMRP17)和数据分析方法。Lunarion宵晖^®流式质谱系统，内置全自动进样及清洗系统，可与组合标记技术Barcoding相结合，实现对大量样品的高通量流式分析。小鼠肿瘤免疫分析用抗体（27指标）不仅可以进行免疫细胞的精细分群，还可以应用于肿瘤细胞与免疫系统之间的相互作用分析以及肿瘤免疫的转化医学研究。宸安生物向研究和临床人员提供包括硬件、配套试剂和高维数据可视化分析套件的完整解决方案，共同推进流式质谱在血液系统疾病、肿瘤免疫、新生抗原等方向的应用。

关于宸安

宸安生物致力于为用户提供强大易用的单细胞解决方案，通过高通量单细胞组学技术和先进算法，提供高分辨率生命科学研究工具和临床诊断方案。