2025版中国药典液相色谱方法参数调整范围解读

2025-06-27 15:29:08, 产品市场、应用部月旭科技

引言

Introduction

随着2025版《中华人民共和国药典》（以下简称《中国药典》）正式颁布并将于2025年10月1日实行，对于25版药典中高效液相色谱方法参数调整允许范围又有哪些变化，在本篇文章中将为大家作结合案例的解读。

总览

首先我们把20版及25版《中国药典》色谱方法参数允许调整范围表做一下对比（参照表1及2），可以发现大部分参数调整范围是基本一致的，但在某些细节处做了修改和补充，使得更加完善和严谨。

表1：2020版《中国药典》色谱参数允许调整范围表

表2：2025版《中国药典》色谱参数允许调整范围表

详细解读

下面我们对2025版《中国药典》色谱参数允许调整表中具体每一项的调整做详细介绍，并配合适当例举加深理解。

1.固定相：

不得改变填充剂的理化性质如填充材质，表面修饰及键合相需保持一致。

2.粒径dp及柱长L：

调整后要求L/dp值在原数值基础上变化范围-25%~+50%。

例如：4.6×150，5 μm的规格要替换为3 μm规格，那柱长可调整的范围的计算如下：

标准要求色谱柱的L/dp值为：150/5=30，则可更换成L/dp为30×0.75~30×1.5=22.5~45这个范围的柱子。那可接受的3 μm的柱长范围为：22.5×3~45×3=67.5~135 mm，根据一般色谱柱规格则可选择4.6×100 mm，3 μm和4.6×125 mm，3 μm这两个规格的柱子。

3.从全多孔填料到表面多孔填料：

在满足等度洗脱要求（理论塔板数为原色谱柱的-25%~+50%）或梯度洗脱要求（所有峰的（t_R/W_h/2）² 值为原色谱柱的-25%~+50%）时可以调整，同时在满足系统适用性以及选择性出峰顺序不变情况下可以使用不同的L和dp组合，而从普通硅胶柱变更为核壳硅胶柱是最常遇到的此类变化，但同时这样的变化往往伴随着其他很多条件（如L、dp、F及V_inj等）的调整才能符合实验要求。

4.柱内径变化：

在L及dp没有调整的时候，可以调整柱内径同时柱内径减小的时候需要调整配套仪器以减小柱外体积对色谱结果的影响。

5.流速F：

改变色谱柱内径及粒径，可按下式计算流速：

dc为内径，dp为粒径。

例如：条件中没有规定流速，可以根据项目情况选择合适的流速，如果标准中规定了流速则流速的调整需按以下要求来调：

等度洗脱的流速调整：

在±50%的范围调整，比如：原标准规定流速1.0，实际检测可以在0.5-1.5的范围内进行。

梯度洗脱的流速调整：

需严格按以上公式调整，比如：5 μm的色谱柱内径由4.0调整为4.6，原流速为1.0 mL/min的条件，调整后流速为：

F₂=1×[(4.6×4.6×5)/(4.0×4.0×5)]=1.3 mL/min

6.进样体积V_inj：

当色谱柱尺寸调整时，为满足系统适用性要求可按此公式计算调整后的进样体积：

同时即使规格尺寸未做调整也可以调整进样体积以达到系统适用性要求，此公式并不适用于细则（3）的调整。

7.等度洗脱流动相比例：

最小比例的流动相组分可在相对值±30%或绝对值±10%的范围内进行调整。两者之间选择较小值。

例如：标准流动相为甲醇:水=75:25。

如需调整流动相比例，药典范围内的调整可以是：小比例为水占25，相对值±30%为7.5，小于10%的绝对值，即水可调整范围为：17.5-32.5，所以流动相调整范围可以为：甲醇:水=82.5:17.5-67.5:32.5。

例如：标准流动相为甲醇:水=60:40。

如需调整流动相比例，药典范围内的调整可以是：小比例组分为水占比40，相对值±30%为12，大于绝对值10%，则水可调整范围绝对值10%来计，即水可以在30-50的范围内调整，所以流动相调整范围可以为：甲醇:水=50:50-60:40。

8.梯度洗脱程序和流动相比例：

需满足下列条件方可适当调整：

1）满足系统适用性要求；

2）出峰顺序不变，分离度和灵敏度满足要求；

3）流动相的组成和梯度洗脱程序应使第一个峰充分保留最后一个峰完全洗脱。

这里药典中描述相对“模糊”需要在实际分析中谨慎对待并根据具体情况做适合调整。

9.柱温：

除另有规定外，对于等度洗脱可以±10 ℃范围内调整，对于梯度洗脱可以±5 ℃范围内调整。即如标准中规定柱温为30 ℃，那么等度洗脱可变化范围为20-40 ℃，梯度洗脱可变化范围为25-35 ℃。

10.流动相缓冲盐浓度：

原规定值±10%范围内调整。

例如：标准规定的盐浓度为0.1 mol/L，则可以在0.09 mol/L或0.11 mol/L的浓度之间进行调整。这个浓度范围内的调整，除了极个别的对盐浓度特敏感的项目，一般项目的分离效果都不太会有变化。

11.pH值：

除另有规定外在原规定值±0.2 pH范围内调整。

例如：标准规定的pH值为2.5，则可以在2.3-2.7的范围内进行。这里需要注意的是酸碱组分对pH值会比较敏感以至pH能直接影晌到分离效果。虽然多数项目在方法学验证中已经做过pH的耐受性重现性验证。但也不排除有些对酸碱很敏感的项目，可以通过细化pH值的方式得到解决，这样既可以满足药典要求，也可以使效果更满意。

12.检验波长：

不允许改变。

应用案例

案例1：菊花含量测定

某客户反馈分离效果不好，有未知杂质干扰主成分。谱图如下:

图1 原条件（流动相一）第二针样品开始有上一针残留干扰

沟通后发现，客户并不是从第一针样开始分离不好，而是进样后第二针开始有干扰，那明显就是前面的样品的强保留杂质。因此，我们参照2025药典关于梯度洗脱参数调整的第3条建议“流动相的组成和梯度洗脱程序应使第一个峰充分保留最后一个峰完全洗脱。”将原梯度的30-40时间段的梯度进行调整，增加其洗脱能力，在保证系统适用性满足的同时解决了问题。