如何快速建立高效液相色谱分析方法

根据样品基质与待测化合物的极性差异选择合适的提取溶剂。如果两者差异很大，选择的溶剂极性靠近目标物即可；但如果两者差异较小，可能就需要考虑使用极性远离基质的溶剂进行多次萃取，同时设计净化的手段。

根据仪器的检出限，判断是否需要使用增敏或者富集手段提高响应。因为根据仪器采集得到的色谱图，色谱峰的响应并不高，这可能是结构本身的原因，也可能是浓度太低导致的。

如果是结构本身的原因：可以通过衍生化的手段来加入带有强烈响应的结构。

如果是浓度太低：则需要通过固相萃取柱、氮吹浓缩或者液液微萃取等手段降低稀释倍数，从而提高上机浓度。

配制流动相并设计洗脱程序，一般大部分的化合物使用C18或者C8色谱柱都能有不错的保留，C8色谱柱相对于C18则更适宜保留极性中等的化合物。

对于容易离子化的化合物，如胺类、羧酸类、盐类等物质，在流动相中可加入缓冲盐，增加流动相中的离子强度，降低化合物在洗脱过程中的扩散现象。

多组分分离时：可以使用梯度洗脱程序。初始时使用5%~10%的有机相先保留2~5 min，然后再开始增大有机相，在最后一个目标物出峰后在0.5 min内恢复初始梯度再保留5 min即可。

化合物较少时：使用等度洗脱也可以。通过调节有机相比例，控制第一个目标物的出峰时间在5~10 min之间，一般都能与杂质有效分离。

验证回收率和相对标准偏差。设计6组平行试验，按照方法检出限的1、2、5倍进行加标即可，测定后计算相对标准偏差。

一般情况下，方法的回收率在80~120%之间，相对标准偏差在10%以内。

通过以上5步，我们可以解决大部分化合物在建立方法过程中遇到的问题，也能找到比较合适的检测方案。只要理解好原理，那么就算遇到特别的问题也能迎刃而解。

作者：色谱冢（月旭公众号签约撰稿人）

排版：赵林

审核：朱晗斐