离液剂在碱性化合物分析中的应用与原理

反相液相色谱分析中，对于酸/碱性化合物可通过离子对色谱法来增加保留，从而达到分离检测的目的。虽然在流动相中加入离子对试剂可以促进分析物的保留与分离，但烷基磺酸类和烷基铵类等离子对试剂，如辛烷磺酸钠、四丁基溴化铵等会吸附在固定相上，导致色谱柱产生不可逆的改性。

假如用被改性的色谱柱开发方法，更换新柱子后，会有分离效果无法重现的风险。为了保证方法的耐用性，流动相含此类试剂的项目，一般都需要专柱专用。而且此类离子对试剂疏水性较强，柱平衡缓慢，有时甚至需要过夜平衡，且很容易会有鬼峰干扰、保留时间不稳定等各种问题。

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针对碱性化合物的分析可以选择用离液剂规避以上不利因素。离液盐亲水性强，使用后易被清洗而不产生明显残留，不仅能增强碱性化合物的保留并改善峰形，而且不会对色谱柱造成改性，具有更好的梯度方法重现性。

离液剂一般为亲脂性的无机阴离子，仅对碱性化合物的保留有增强作用^【1】。离液型离子有氯离子、硝酸根离子、三氟乙酸根离子、四氟硼酸根离子、高氯酸根离子、六氟磷酸根离子等。上述离子的离液序列依次为：Cl^-＜NO₃^-＜CF₃COO^-＜BF₄^-＜ClO₄^-＜PF₆^-。离液阴离子具有扰乱流动相中水-水、水-甲醇或水-四氢呋喃之间氢键的能力，以及破坏碱性质子化分析物的溶剂化分子层的能力。

1. 离子对作用：

和传统的离子对试剂一样，离液剂阴离子会与分析物阳离子形成中性的离子对，疏水性增强，从而增强在反相色谱中的疏水保留。^【2】

2. 离液作用：

离液剂阴离子会打破分析物的溶剂化层，因此增加分析物的疏水性保留。

离子型化合物溶解在水中解离成阴、阳离子，水分子为极性分子，它们之间必然存在静电引力。当水分子与离子间相互作用力大于水分子间的氢键键能时，水的结构就遭到破坏，在离子周围紧密包围一些溶剂分子形成有序的水化膜（-O接近包围阳离子，-H接近包围阴离子）。水化膜中的水分子又通过氢键吸引邻近的水分子，碱性化合物亲水性增强，在反相色谱中保留减弱。

离液剂阴离子可以通过破坏水的氢键，改变水的结构，让水分子变得更加无序。因此碱性分析物的水化层会由于离液剂阴离子的存在而被破坏，也就是降低其溶剂化，通过静电作用，形成“碱质子化合物-离液阴离子”中性化合物，从而增强保留。

3. 亲脂作用：

离液剂阴离子由于亲脂性比较强，会吸附在固定相的表面，从而与原色谱柱的固定相形成“伪固定相”。在原来疏水的固定相上引入了带电的成分，增加固定相与分析物的电荷作用。

三种机理都可能在实际情况下共存，但哪种占主导取决于洗脱液的类型、组成和固定相的性质。

离液剂对碱性质子化合物如脒类，胍类，胺类及其衍生物的分离具有实际应用意义。

色谱柱：月旭Ultimate LP-C18（4.6×250mm，5μm）

流动相A：0.2%六氟磷酸钾（用磷酸调pH2.5）

流动相B：乙腈   梯度洗脱

此结构的物质使用六氟磷酸钾作为离液剂分离效果良好。

参考文献：

【1】 [RP-HPLC中的离液剂：原理与应用] 禹飞乐

【2】 [浅谈RP-HPLC中离子对试剂与离液剂的异同及应用] 药事纵横