正相？反相？手性分离模式如何选择？

哈喽，小伙伴们，还记得上个世纪五、六十年代震惊世界的“反应停事件”吗？反应停学名为沙利度胺Thalidomide，结构见下图，其消旋体曾被用作缓解妊娠反应的药物。但是后来才发现其中的R-型异构体才是有效的抗呕吐成分，可减轻妊娠恶心、呕吐等症状；而S-型异构体则会导致婴儿畸形，结果当时在西德、荷兰和日本等地区产生了大批的畸形儿。

随着生物工程和生命科学的发展，科学家已经认识到，手性化合物例如手性药物异构体尽管其物理和化学性质几乎完全相同，只有旋光性不同，但它们在生物体内的生理活性和药理作用却存在很大的差别。为此，制药行业中，必须对有效成分的对映体进行拆分，而不能将其混合物作为药物出售。 

采用液相色谱法分离手性化合物，是目前首选方法之一，要考虑手性柱的固定相类型、分离模式及流动相溶剂。现在市面上手性固定相类型较多，手性色谱有正相分离和反相分离两种模式，流动相溶剂的选择与固定相、样品性质、分离模式有关。今天，小编就和大家聊聊，如何选择合适的手性分离模式。

当样品溶于非极性溶剂中，选择正相分离模式。常用的流动相组合是烷烃类和醇类。其中，醇类起到了洗脱作用，烷烃类用来调节流动相的洗脱强度。

烷烃类试剂，可选择正己烷、正戊烷、异己烷、正庚烷，它们对样品分离没有太大影响，不会改变选择性和分离度，选择正己烷较多。

流动相中的醇类，对目标物的分离起关键作用，不同的醇有不同的选择性，且随着流动相中醇类的比例提高，目标峰的保留时间缩短。最常用的醇类是乙醇和异丙醇，它们的洗脱能力是：乙醇>异丙醇。甲醇在烷烃中的溶解性不好，正己烷中甲醇的最大含量是5%。如果要在烷烃中加入甲醇，最好同时加入一定量的乙醇，提高流动相的溶解性。

在手性色谱中，为改善目标物的峰形，需要在流动相中添加酸或者碱。如果目标物是酸性化合物，往往要在流动相中加入酸性添加剂，如三氟乙酸、乙酸、甲酸等。如果目标物是碱性化合物，要在流动相中加入碱性添加剂，如二乙胺、三乙胺、丁胺、乙醇胺等。酸性或碱性添加剂的加入量一般为0.1%~0.3%，最大不超过0.5%，要注意色谱柱的pH耐受范围。

需要注意的是：

1、正相色谱柱安装前，必须先用合适的流动相冲洗整个仪器管路，包括进样器。有些试剂（如丙酮、氯仿、二甲基甲酰胺（DMF）、二甲基亚砜、乙酸乙酯、二氯甲烷、THF）会破坏手性固定相的结构，请不要使用这些溶剂作为流动相的组成部分，或者作为样品稀释剂。如果有无法确定的，请咨询厂家。

2、色谱柱能使用纯甲醇或者纯乙腈作为流动相，如果要将正己烷换成甲醇或者乙腈，或者换成其他极性溶剂，需要用纯异丙醇作为溶剂充分过渡。

3、正相手性柱应避开含水的流动相。

溴甲基苯异丙酸消旋体的测定

液相条件

色谱柱：Ultimate^® Cellu-J（4.6×250mm，5μm)  。 

流动相：正己烷：乙醇：三氟乙酸（90：10：0.1）；

检测波长：220nm；

柱温：25℃；

流速：1mL/min；

进样量：10μL；

样品配置：1mg/mL，乙醇/正己烷（1/1）溶解。

如果样品溶于含水极性溶剂时，选择反相分离模式。常用的流动相组合是有机相和水相。其中，水相用来调节流动相的洗脱强度，常用的水相可以是磷酸盐缓冲液，或者是纯水。有机相起到了洗脱作用，常用的有机相是乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇等，且有机相比例越高，目标物的保留时间越短。

盐酸达泊西汀的测定

液相条件

色谱柱：Ultimate^® Cellu-JR（4.6×250mm，5μm)  。 

流动相：甲醇：乙醇：二乙胺（95：5：0.1）；

检测波长：220nm；

柱温：20℃；

流速：0.6mL/min；

进样量：5μL；

样品配置：1mg/mL，甲醇溶解。

目前，月旭科技的手性固定相填料包括 Cellu-D、Cellu-J、Amy-D等，可以满足绝大多数手性样品分离需求。各位小伙伴有手性样品分离或需要筛选柱子，欢迎联系月旭售前技术热线或当地销售。