改善峰形，提升灵敏度，六大“金刚”齐亮相！

众所周知，分析物损失一直都是色谱分析工作者面临的一个重大挑战。我们传统的色谱柱柱管大多数是不锈钢的，一些金属敏感型分析物（典型的如图1：磷酸化分子和羧化分子）会与金属柱管表面发生特异性吸附，进而导致色谱峰形差、灵敏度低和回收率不佳等诸多分析问题。

图1. 金属敏感型分析物示例

月旭科技推出的金刚石镀层系列色谱柱采用高性能表面镀层金刚石薄膜（DLC）技术，能够有效减少金属相互作用造成的吸附损失。从而有效改善峰形、提升灵敏度和获得更高的回收率。

该系列色谱柱对所有样品均适用，尤其适用于分析一些对金属敏感的化合物。

1、柱管惰性，有效降低特异性吸附。

2、改善峰形，改善分离度。

3、基线更平，灵敏度更高。

4、大幅减少样品残留，减少色谱柱活化和钝化时间，提高实验效率。

在生物科学领域，体积排阻分离色谱（SEC）作为一种简单、稳健的方法常用于蛋白质的分离。SEC在理想色谱条件下不涉及样品和固定相的相互作用。然而，在非理想色谱条件下，样品与硅胶基质或不锈钢柱管之间都可能发生吸附作用，导致色谱灵敏度低的问题。

采用高性能表面镀层金刚石薄膜（DLC）技术的色谱柱可有效降低因柱管产生的样品吸附，在分离牛血清白蛋白样品时，较常规不锈钢柱管的色谱柱具有更出色的灵敏度（详见案例1）。

色谱柱：

Xtimate^® Bio SEC-300，(4.6×300mm，5μm，常规不锈钢管）；

Xtimate^® DLC Bio SEC-300，(4.6×300mm，5μm，金刚石柱管）。

流动相：150mM磷酸盐（pH 6.80） ；

检测波长：215nm；

柱温：25℃；

流速：0.2mL/min；

进样量：10μL；

样品浓度：50μg/mL。

含羧酸和磷酸基团的样品对金属比较敏感，容易与不锈钢柱管的表面发生吸附作用，导致色谱峰形不佳和灵敏度下降。采用惰性金刚石镀层柱管的色谱柱较常规不锈钢柱管的色谱柱在分析这些样品时（羧酸化样品：详见案例2~3；磷酸化样品：详见案例4）展现出更高的灵敏度、更优的峰形。使分析工作者更容易准确积分和定量这些棘手化合物。

色谱柱：

Ultimate^® Polar RP，(4.6×250mm，5μm，常规不锈钢管）；

Ultimate^® DLC Polar RP，(4.6×250mm，5μm，金刚石柱管）。

流动相：20mM 磷酸氢二钾用磷酸调节pH到2.7/乙腈=75/25；

检测波长：254nm；

柱温：25℃；

流速：1.0mL/min；

进样量：20μL；

样品溶液配置： 

称取硫脲 0.0253g、2-氰基苯甲酸0.0248g、2-羟基苯甲酸0.0248g、邻苯二甲酸0.0255g、2-硝基苯甲酸0.0250g、4-羟基苯甲酸0.0258g，用水定容到100mL。

色谱柱：

Ultimate^® ALK C18，(4.6×250mm，5μm，常规不锈钢管）；

Ultimate^® DLC ALK C18，(4.6×250mm，5μm，金刚石柱管）。

流动相：1%冰醋酸溶液/乙腈=90/10；

检测波长：327nm；

柱温：30℃；

流速：1.0mL/min；

进样量：10μL；

样品溶液配置：

1） 稀释液：水；

2） 再溶溶液：取装量差异下的本品内容物，混匀，研细，取约0.48g，加入50%甲醇50mL， 超声处理（功率500W，频率40kHz）45分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

色谱柱：

Ultimate^® AQ-C18，(4.6×250mm，5μm，常规不锈钢管）；

Ultimate^® DLC AQ-C18，(4.6×250mm，5μm，金刚石柱管）。

流动相：80mmol/L 碳酸氢铵溶液/甲醇=95/5；

检测波长：235nm；

柱温：30℃

流速：1.0mL/min；

进样量：20μL；

样品溶液配置：取本品10mg，加流动100mL，制成每1mL含100μg的溶液。

建议对金属敏感样品的分析（如：磷酸化和羧化分析物）。

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