如何获得良好的流动相，看这6点就够了！

（图片来源：baotu）

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流动相的过滤、储存、脱气、

更换注意事项

所有溶剂使用前都必须经0.45µm或0.22µm的滤膜滤过，以除去杂质微粒。色谱纯试剂也不例外，除非在标签上标明“已滤过”，生产时间比较久的乙腈更需要过滤，由于长期放置可能会存在二聚体或三聚体。 用滤膜过滤时，特别要注意分清有机相脂溶性滤膜和水相水溶性滤膜。

流动相贮存应依据后续实验选择适当的储存容器，液相色谱一般选择玻璃溶剂瓶，而离子色谱淋洗液一般选择聚丙烯材质的淋洗液罐。贮存容器一定要盖严，防止溶剂挥发伤害人体，防止引起组成变化，也防止氧气和二氧化碳溶入流动相。

磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉，应尽量新鲜配制使用，不要贮存。容器应定期清洗，特别是盛水、缓冲液和混合溶液的瓶子，以除去底部的杂质沉淀和可能生长的微生物。

HPLC所用流动相必须预先脱气，否则容易在系统内逸出气泡，影响泵的工作。气泡会影响检测器的灵敏度、基线稳定性，甚至无法检测。溶解气体还可能引起溶剂pH的变化，对分离或分析结果带来误差。

溶解在流动相中的氧还可能与样品、流动相甚至固定相如烷基胺反应。溶解氧能与某些溶剂如甲醇、四氢呋喃形成有紫外吸收的络合物。在荧光检测中，溶解氧在一定条件下还会引起淬灭现象。在电化学检测中特别是还原电化学法，氧的影响更大。

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1）离线脱气法：

如超声脱气，用来去除流动相中较大的气泡。在线脱气法，用来去除流动相中较小的气泡。虽然现在很多HPLC色谱仪已经配制在线脱气机，但超声脱气仍不可省。在线脱气仅能去除比较小的气泡，对于大气泡很难去除，导致脱气机超负荷工作，影响其寿命。

2）真空脱气（在线脱气机）

也是比较常用的脱气方法，流动相通过被抽真空负压的脱气包，溶入的气体形成气泡溢出，其效果仅次于氦气脱气。目前绝大多数液相色谱使用的是在线脱气机，即真空脱气。

3）其他脱气方法：

氦气脱气：可除去80%～90%的溶入气体，且可有效去除水溶液中溶解的顽固气体，在电化学检测时常用，因其价格昂贵在其他实验中未见普及。

加热回流脱气：仅适用于不含有机溶剂的流动相。

流动相过滤头可以防止溶液中的微小颗粒进入HPLC系统。有些滤头顶端阶梯式连接出口可分别用于1.5mm，2.2mm，3.5mm内径的管路连接。滤头应定期清洗，尤其是水相使用的滤头，要定期及时清洗。

先将流动相滤头拿出溶剂液面，抖去滤头上残留的大部分溶剂后再放入下一个流动相，避免残留的溶剂将下一个流动相改性。

作者：庞庆龄

排版：赵林

审核：邹天骏 赵桂芝

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