2023-02-21 12:31:23, 陈李洋 赛默飞世尔科技生命科学产品
在荧光定量PCR实验中,相对定量方法适用于大多数基因表达研究。这种定量方法以稳定表达的内参基因作为参照,用于分析实验样本间目的基因表达水平变化。由于实验设置简单,比较Ct法是相对定量实验中最常用的方法,实验结束后,利用2-△△Ct算法即可对相对表达结果进行计算。在平时的交流沟通中,我们了解到,有些用户利用qPCR软件得到Ct值后,会手动进行相对定量的计算。其实,ABI的各种机型搭配实验软件,均可以直接给出相对定量的计算结果,这些结果与手动计算的结果是一致的,可以免去手动计算的过程。
今天我们利用ABI荧光定量软件中比较Ct法的Sample数据,帮大家梳理一下比较Ct法的计算流程,帮助大家消除对软件结果使用的疑虑。
比较Ct法的基本原理
比较Ct法相对定量结果计算
相对定量上下限(RQ min and RQ max)的计算
参考文献:
1. Livak, K. J., & Schmittgen, T. D. (2001). Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2− ΔΔCT method. methods, 25(4), 402-408.
2. User Bulletin: Applied Biosystems Real-Time PCR Systems - Relative Quantification (RQ) Algorithms in Applied Biosystems Real-Time PCR Systems Software. July 2007, Part Number 4378622.
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