液质联用在ADC分析中的应用

ADC既具有大分子药物的特异性，又具有小分子药物的细胞毒性，且ADC在研发过程中均需要对其抗体部分和小分子药物部分进行生物定量，LC-MS/MS和LC-HRMS技术正越来越多的被用于大分子表征和定量。与传统ELISA方法相比，LC-MS方法开发周期更短，方法的通用性更好；且基于高分辨质谱的LC-HRMS，在对大分子进行定量的同时，还可以对ADC类药物的DAR值进行测定，助力完善ADC的生物表征。

典型的主流LC-MS/MS ADC分析方法使用针对ADC抗体成分的捕获试剂，然后使用ADC的化学或酶裂解释放替代分析物。在TAb分析中，替代分析物是来自抗体组分的独特的多肽(又名标志肽)，而在偶联有效载荷分析中，替代分析物是附着在连接子上释放的有效载荷。

在这种方法中，使用抗payload抗体捕获ADC。与基于LC-MS/MS的TAb分析类似，来自人Fc区或CDR区的肽被用作非临床研究的标志肽，而对于临床研究，来自CDR区的标志肽被使用。

偶联有效载荷分析的目的是测量与抗体结合的有效载荷分子的浓度。偶联有效载荷涉及有效载荷的直接测量，因此可以提供对靶标部位的有效载荷暴露的更准确的评估，并且可以提供暴露量与疗效的相关性。

LC-MS/MS是偶联有效载荷测量的主要平台。在基于LC-MS/MS偶联有效载荷分析中，捕获剂是针对ADC分子的Ab组分的。因此，免疫捕获步骤类似于基于LC-MS/MS的Tab分析法。一旦用免疫亲和的方法分离，有效载荷分子从ADC释放，并用LC-MS/MS测量切割的有效载荷，根据连接子化学，酶反应或化学反应被用于从ADC切割有效载荷。虽然偶联有效载荷分析中的替代分析物是一种小分子药物，但免疫捕获技术的使用保证了该分析的大分子生物分析方法验证指南。

LC-MS/MS法定量偶联有效载荷有其局限性。主要的限制是在分析带有不可切割连接子的ADC时，在ADC免疫亲和分离后，ADC的抗体成分需要完全蛋白分解以释放用于替代分析物的多肽-连接子偶联的有效载荷。在这些情况下，参考标准和稳定的标记IS可能不易获得。此外，不可切割的、基于赖氨酸的随机偶联ADC带来了挑战，因为它们在ADC分子完全蛋白分解后形成多个连接到有效载荷的多肽片段。