六味安消胶囊的分析

●●●

按照客户提供方法，对客户提供的六味安消胶囊样品进行分析，要求对大黄素及其相邻杂质峰取得基线分离。

由于客户提供的对照溶液为大黄素与大黄酚的混合溶液，因此无法判断出峰顺序，故在此给出峰1与峰2的光谱图以辅助判断。

首先，使用键合五氟苯基的全多孔型色谱柱CAPCELL PAK PFP对总大黄素与总大黄酚的混合样品进行分析，结果如图1及表1，杂质峰位于峰1之前，二者在18min内可得到良好分离，分离度为4.38。

▲ 图1 CAPCELL PAK PFP所得分析色谱图

注：峰上标数字由下至上依次为分离度与拖尾因子，下同。

▲ 表1 各色谱峰拖尾因子及分离度

（CAPCELL PAK PFP）

其次，使用键合金刚烷基的高极性色谱柱CAPCELL PAK ADME进行分析，结果如图2及表2，杂质出峰位置在峰1与峰2之间，与相邻的峰1分离度为1.66，在12min内可得到有效分离。

▲ 图2 CAPCELL PAK ADME所得分析色谱图

▲ 表2 各色谱峰拖尾因子及分离度

（CAPCELL PAK ADME）

色谱柱：CAPCELL PAK PFP S5; 4.6mm i.d.×250mm

CAPCELL PAK ADME S5; 4.6mm i.d.×250mm

流动相： 0.1%磷酸：甲醇=20：80

流  速： 1.0 mL / min

温  度： 40 °C

检  测： PDA 254nm

样  品： 客户提供总大黄素与总大黄酚混合样品

进样量： 10 µL

接下来，为进一步缩短分析时间，尝试使用核壳型色谱柱CAPCELL CORE C18及CAPCELL CORE PFP分别进行分析。

如图3、表3，使用CAPCELL CORE PFP色谱柱对总大黄素与总大黄酚的混合样品进行分析时，杂质在峰1与峰2之间出峰，与峰1分离度为3.22，与峰2分离度为2.01，杂质与峰1、峰2在5min内即可得到基线分离。

▲ 图3 CAPCELL CORE PFP分析所得色谱图

▲ 表3 各色谱峰拖尾因子及分离度

（CAPCELL CORE PFP）

色谱柱： CAPCELL CORE PFP S2.7; 4.6mmi.d.×150mm

流动相： 0.1%磷酸：甲醇=20：80

流  速： 0.8 mL / min

温  度： 40 °C

检  测： PDA 254nm

样  品： 客户提供总大黄素与总大黄酚混合样品

进样量： 10 µL

如图4、表4所示，使用CAPCELL CORE C18色谱柱进行分析时，杂质在峰1与峰2之间出峰，杂质与其相邻的峰1之间分离度为1.75，二者在10min内可得到有效分离。

▲ 图4 CAPCELL CORE C18分析所得色谱图

▲ 表4 各色谱峰拖尾因子及分离度

（CAPCELL CORE C18）

色谱柱： CAPCELL CORE C18 S2.7; 2.1mm i.d.×150mm；

流动相： 0.1%磷酸：甲醇=20：80

流  速： 0.2 mL / min

温  度： 40 °C

检  测： PDA 254 nm

样  品： 客户提供总大黄素与总大黄酚混合样品

进样量： 2 µL

最后，使用UPLC专用的小粒径高耐压的CAPCELL PAK C18 IF2 S2、CAPCELL PAK ADME S2色谱柱，在客户提供条件基础上，将流动相中的甲醇更换为乙腈，并对有机相比例进行调整，对总大黄素与总大黄酚的混合样品进行分析。

如图5、表5所示，使用CAPCELL PAK C18 IF2 S2色谱柱进行分析时，杂质在峰1与峰2之间出峰，杂质与峰1的分离度可达到8.30，与峰2分离度可达到8.29。

▲ 图5 六味安消胶囊分析色谱图（IF2、60%乙腈）

▲ 表5 各色谱峰拖尾因子及分离度

（CAPCELL PAK C18 IF2）

色谱柱： CAPCELL PAK C18 IF2 S2; 2.1mm i.d.×100mm

流动相： 0.1%磷酸：甲醇=40：60

流  速： 0.2 mL / min

温  度： 40 °C

检  测： PDA 254 nm

样  品： 客户提供总大黄素与总大黄酚混合样品

进样量： 0.5 µL

如图6、表6所示，使用CAPCELL PAK ADME S2色谱柱进行分析时，杂质在峰1与峰2之间出峰，杂质与峰1的分离度可达到6.08，杂质与峰2分离度为3.85。

▲ 图6 六味安消胶囊分析色谱图

（ADME S2、50%乙腈）

▲ 表6 各色谱峰拖尾因子及分离度

（CAPCELL PAK ADME S2）

色谱柱： CAPCELL PAK ADME S2; 2.1mm i.d.×50mm

流动相： 0.1%磷酸：乙腈=50：50

流  速： 0.2 mL / min

温  度： 40 °C

检  测： PDA 254nm

样  品： 客户提供总大黄素与总大黄酚混合样品

进样量： 0.5 µL

两款UPLC色谱柱均能在10min内实现杂质与峰1、峰2的良好分离。

综上所述，在0.1%磷酸 / 甲醇体系下进行分析，使用大阪曹達CAPCELL PAK PFP及CAPCELL PAK ADME可分别在18min、12min内实现大黄素、大黄酚及相邻杂质的基线分离；

使用核壳型色谱柱CAPCELL CORE PFP及CAPCELL CORE C18色谱柱可缩短分析时间，分别在5min、10min内实现快速分析，客户可进一步提高流速，以实现更高效的分析；

在0.1%磷酸 / 乙腈体系下进行分析，使用UPLC用色谱柱CAPCELL PAK C18 IF2 S2、CAPCELL PAK ADME S2，在常规流速0.2 mL / min条件下，峰1、峰2与其相邻杂质在10min内均可达到基线分离，且峰形良好。由于该两款色谱柱为UPLC色谱柱，最大耐压值为100MPa，客户可通过提高流速来进一步缩短分析时间。

本实验数据为客户尝试了多款色谱柱，客户可根据不同需求选择合适的色谱柱。