No.253 | 感冒灵颗粒中咖啡因和马来酸氯苯那敏的分析

1. 色谱柱筛选

选用5支不同极性和疏水性的的C18色谱柱，包括：

CP系列

中等极性

CAPCELL PAK C18 MGII

高表面极性

CAPCELL PAK C18 AQ S3/S5

低表面极性

SUPERIOREX ODS

DP系列

DAISOPAK SP-100-5-ODS-P

使用以上色谱柱，分别对供试品（样品1）进行了分析对比，得到结果如图1所示。

结果显示，在AQ S3色谱柱上，马来酸氯苯那敏和咖啡因出峰顺序与其他色谱柱相反，另外4支C18色谱柱中，MGII色谱柱上马来酸氯苯那敏峰积分峰面积明显大于其他色谱柱，可能有未知杂质峰合并；S-ODS色谱柱与峰前杂质分离度不满足基线分离要求；AQ S5和ODS-P色谱柱相对分离结果较好。

考虑该方法水相比例较高，我们暂时使用能够在纯水相下稳定使用的AQ S5色谱柱上，进行了下一步的方法摸索。

图1 不同色谱柱对比结果

【色谱条件】

色谱柱：

CAPCELL PAK C18 AQ S3; 4.6×250

CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6×250

CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6×250

SUPERIOREX ODS S5; 4.6×250

DAISOPAK ODS-P S5; 4.6×250

流动相：A：水（含0.5%磷酸和0.4%三乙胺）

流动速：1 mL / min

温动度：30 ℃

检动测：PDA 264 nm

浓动度：客户提供液标

进样量：10 µL

2.流动相条件影响因素

使用C18 AQ色谱柱，分别对不同流动相条件进行了方法调整，并对比了分析结果。

2.1 色谱柱筛选

在30 ℃和40 ℃柱温下的分析结果如图2所示。

当柱温升高时，咖啡因保留时间明显缩短，同时未知杂质峰出峰顺序由马来酸氯苯那敏后移动至前面，但峰面积差别不大（30 ℃：咖啡因：379,605，氯苯那敏：182,560；40 ℃：咖啡因：376,908，氯苯那敏：184,753）。

柱温对该项目影响较大，特别是对未知杂质峰会表现出不同的出峰顺序。

图2 不同柱温对比结果

2.2 不同有机相比例影响

分别将有机相比例调整±1%，在5%、6%、7%有机相条件下进行了对比（柱温使用40℃），结果如图3所示。

即使流动相比例仅有1%变化，咖啡因和马来酸氯苯那敏保留时间均有较大变化，同时杂质分离情况也有明显差别。在5%乙腈条件下，马来酸氯苯那敏与峰前杂质未能分离；随着乙腈比例提高，又会出现峰后杂质与目标峰分离度下降的情况。

图3 不同有机相比例对比结果

2.3 流动相A配置的影响 

从流动相的微小变化对分析结果出现较大改变的情况来看，流动相的配置过程同样重要。不同实验员对流动相A进行配置时，在同一台仪器和同一支色谱柱上，也出现了咖啡因和马来酸氯苯那敏保留时间差异较大，同时分离结果不完全一致的情况。结果如图4所示。

从流动相的微小变化对分析结果出现较大改变的情况来看，流动相的配置过程同样重要。不同实验员对流动相A进行配置时，在同一台仪器和同一支色谱柱上，也出现了咖啡因和马来酸氯苯那敏保留时间差异较大，同时分离结果不完全一致的情况。结果如图4所示。

图4 不同实验员配置流动相后分析结果对比

结   论

使用CAPCELL PAK C18 AQ S5色谱柱，可以实现感冒灵颗粒中咖啡因和马来酸氯苯那敏与杂质的分离。但色谱条件中诸多细节的微小差异都会对实验结果产生影响，实际分析中在方法转移上较为困难，请根据实际情况，对实验条件进行再调整。

感冒灵颗粒分析  推荐用柱

F92045 CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6×250

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