直播开课 | 深度解析外泌体课题研究思路与研究方法！

2024-05-23 12:40:35, 小 M MedChemExpress (MCE)

实验没思路，小 M 来相伴！

小伙伴们，我又来啦~今天小M 带大家一起来了解外泌体！

外泌体 (Exosome) 是直径约为 30-150 nm 的细胞外囊泡，具有脂质双分子层结构。外泌体参与细胞之间的交流和物质的运输，还与疾病的产生有关。

主题直播

细胞在正常及病理状态下分泌外泌体，封装的 DNA、RNA、脂质、代谢物以及蛋白质作为生理和病理信息传递给受体细胞，参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化、肿瘤侵袭等方面。那么外泌体的各种分离方法有什么优缺点？外泌体如何结合不同的组学技术探究相关分子机制？

5 月 28 日 14:00 MCE 主题直播间，小 M 将详细介绍外泌体的分离方法、表征鉴定和示踪技术，并对当前外泌体在疾病机制中的课题思路进行概述。更多精彩分享，尽在直播间~

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▐ 外泌体的分离技术

外泌体来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。外泌体含有丰富的内含物 (包括核酸、蛋白和脂质等)，参与细胞间的分子传递。外泌体常见的分离方法有：超速离心法、密度梯度离心法、色谱法、免疫分离法、超滤法和聚合物沉淀法。

图 1. 外泌体的生物标记物和内容物^[1]。

▐ 外泌体的表征鉴定

分离富集之后，我们又该如何鉴定提取出来的物质是外泌体呢？根据国际细胞外囊泡研究协会 (ISEV) 提出的 MISEV 2018 指南，外泌体鉴定包含 3 个标志：透射电镜、粒径和蛋白标志物。透射电镜鉴定外泌体形态；粒径分析鉴定外泌体大小，蛋白标志物则通常通过 Western Blot 鉴定。

▐ 荧光成像外泌体示踪技术

亲脂性染料能够对外泌体进行标记，亲脂性染料主要包括两类，一是 PKH67 (绿色) 和 PKH26 (红色荧光)，由于它们可以与外泌体的脂质双层膜稳定结合，所以染色效果较好，应用较广泛。二是 DiL(橙色荧光)、DiO (绿色荧光)、DiD (红色荧光)、DiR (深红色荧光)。其中 DiR 的红外荧光可穿透细胞和组织，在活体成像中用来示踪。

图 2. MNNG/HOS 和 U-2OS 细胞摄取 PKH 标记的外泌体实验^[2]。

好礼享不停~

[1] Hade MD, Suire CN, Suo Z. Mesenchymal stem cell-derived exosomes: Applications in regenerative medicine. Cells. 2021 Aug 1;10(8):1959.

[2] Yang H, He C, Feng Y, Jin J. Exosome‑delivered miR‑486‑3p inhibits the progression of osteosarcoma via sponging CircKEAP1/MARCH1 axis components. Oncol Lett. 2023 Nov 16;27(1):24.