No.251 | 液相方法开发攻略 - 第二节：达成分离

 第251条推送   每周五17:00准时更新

在进行液相色谱分析时，我们通常有以下诉求：

继上期的液相方法开发攻略第一节：实现保留，今天YoYo老师继续为大家带来第二节：达成分离。

● 实现保留

● 达成分离

● 峰形和理论塔板数

● 寿命

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对于不同厂家、不同固定相的色谱柱，可以通过表面极性与疏水性的参数图来进行比较。

通过对不同固定相色谱柱进行分析测定，对其表面极性与疏水性参数作图，可以很直观地看出各色谱柱的分离选择性区间，从而更容易根据目标化合物的极性与疏水性进行色谱柱的选择。

通常，极性化合物可选择高表面极性色谱柱进行分析，疏水性化合物可选择中、高表面疏水性色谱柱进行分析。（具体细节可咨询大曹三耀技术中心）

▲表面极性、疏水性参数图

*表面极性：α（苯甲酸甲酯/甲苯）

 疏水性：α（甲苯/苯）

以下是大阪曹達推荐的色谱柱选择方法

在此举一个为达成分离而更换色谱柱、调整分析条件的例子。

在10 mmol/L甲酸铵 / 乙腈 = 80 / 20条件下，使用中等极性C18柱对以下四种物质进行分析，咖啡因与吲哚硫酸K之间未能得到良好分离。

将色谱柱更换为能耐纯水的高表面极性色谱柱后，极性化合物保留时间有所延长，但依然未能实现分离；调整流动相，降低有机相比例后，可以得到分离，但分析时间也延长至原来的3倍。

对于这种情况，我们强烈建议您尝试大阪曹達独有的键合金刚烷基官能团的CAPCELL PAK ADME-HR色谱柱，这款色谱柱展示出与常规反相填料完全不同的分离选择特性——

在上述条件下，不改变流动相条件，而是直接将色谱柱更换为 CAPCELL PAK ADME-HR，咖啡因与吲哚硫酸K之间得到了基线分离，同时总分析时间依然保持在10min以内，分析效率大大提高。

由此可见，固定相的改变对分离的实现起到至关重要的作用，色谱柱的选择是分离的关键。

我们推荐CAPCELL PAK ADME-HR色谱柱作为反相分析中的第二选择（第一选择肯定是C18啦~）。

SPOLAR C18是采用最新C18键合技术，高品质、低成本的反相柱。具有优越的耐酸性，100000段/m的高理论塔板数，该柱更适于疏水物质的分析。

在CH3OH / CH3CN = 90 / 10条件下，对几种脂溶性维生素（A、D2、D3、E）进行分析，比较几款不同极性的C18与C8色谱柱的分离选择性。

其中，SPOLAR C18色谱柱的分析时间短，分离度高。