【NIFDC文献系列赏析】自发荧光iCIEF指纹识别人诺如病毒样颗粒疫苗

      重组疫苗药品中蛋白质含量和鉴定是疫苗批放行和稳定性重要指标，WHO和美国FDA等监管机构要求对蛋白质含量和异质性进行定量检测来评估工艺参数及产品配方。目前在佐剂存在条件下，准确评估疫苗药品中蛋白质含量和异质性具有挑战性，特别是分子大小和结构更复杂病毒样颗粒（VLP）。当重组蛋白疫苗中蛋白质浓度较低时，目前大多数方法不能准确评估蛋白质含量和异质性。已有研究证明，通过检测含有色氨酸等蛋白质的自发荧光技术有可能解决相关挑战。中检院科学团队进行有意义探索和研究，利用自发荧光毛细管电泳技术分析人诺如病毒疫苗。

      人诺如病毒（HuNoVs）是引起急性肠胃炎的主要原因之一。全球范围内，每年因诺如病毒感染导致的病例约6.85亿，造成20万人死亡，所引起经济损失超过六百亿美元。5岁以下儿童感染患者约两亿。因此，亟需有效疫苗接种作为预防措施。目前，暂无获批上市的诺如病毒疫苗。

图片来源：《2022年全球和中国疫苗行业报告》，弗若斯特沙利文

      HuNoVs无法通过体外细胞大规模培养，限制了传统减毒活疫苗和灭活疫苗的研发，因此HuNoV疫苗的开发不得不依赖于具有包膜蛋白表达的自组装病毒样颗粒（VLPs）。VLPs的异质性会对免疫原性产生影响，应作为疫苗评估的关键质量属性加以考量。2022年1月，中国食品药品鉴定研究院（NIFDC）利用全柱成像毛细管等电聚焦电泳技术（iCIEF）自发荧光通道表征来自安徽智飞龙科马生物制药有限公司处于临床I/II期的诺如病毒四价疫苗（毕赤酵母）电荷异质性。数据表明该方法在评估HuNoV VLPs疫苗的生产一致性显示出巨大的应用前景。可用于疫苗行业常规的样本分析，有望进行VLP疫苗产品的批次放行和稳定性研究。

      不同基因组或基因型的HuNoV VLPs显示出不同指纹图谱，不同浓度下指纹图谱重复性极佳（如下图所示）。

4种HuNoV VLPs（GI.1、GII.3、GII.4、GII.17）指纹图谱

      疫苗效力是产品放行和保质期内最重要的考量。通常利用动物模型对其体液和/或细胞免疫反应作为指标，以及对其稳定性进行评价。本研究中，研究人员利用NIF检测HuNoV VLPs是否过期。如下图所示，过期HuNoV VLPs的指纹图谱明显与效期内产品不同（如下图所示）。

自发荧光模式可表征疫苗是否过期

      来自ProteinSimple品牌Maurice系列全自动蛋白质表征系统的紫外吸收UV280nm通道是经典iCIEF等电聚焦电泳检测通道。而自发荧光（NIF：Native Fluorescence）通道是指利用芳香族氨基酸（色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸）的自发荧光来实现检测。

      NIF不仅与紫外吸收通道检测出的峰形一致，还无需添加染料，有更高的灵敏度和极佳的信噪比。Maurice可同时进行紫外吸收和自发荧光双通道检测。因此，Maurice已被广泛地应用于创新型疫苗的研发和生产中。

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