2021-07-28 02:43:46, 基泰生物 上海基泰生物科技有限公司
随着医药行业的飞速发展,生物技术药物的研究也进入了更高一级平台。生物技术药物是指通过DNA重组技术或其他创新生科技型生物技术生产的治疗药物,主要包括细胞因子、纤溶酶原激活剂、重组血浆因子、生长因子、抗体、疫苗和寡核苷酸药物等,临床应用于治疗恶性肿瘤、心脑血管疾病、糖尿病、类风湿性关节炎等重症疾病。生物技术药物的治疗效果显著、副作用较小,逐渐成为新药研制的重点。随着《中华人民共和国药典》(2020年版)颁布实施,生物药物分析与检测技术也不断更新完善,生物技术药物的质量控制将会大幅提高,分析检测标准逐步与国际接轨,药品质量将达到国际水平。本文结合当前科技发展趋势,对生物技术药物进行分析和检测的方法进行阐述,期待为生物技术药物分析检测技术的长远发展作出一定贡献。
生物技术药物分析是一门集研究、检测和控制于一体的综合性学科,主要是分析鉴定各类生物技术药物的化学组分、构型、形貌特征,检测药物质量、不同药物中各组分含量、药代降解产物的含量。生物技术药物,特别是蛋白质药物,由于自身稳定性较低,极易发生部分肽链断裂或折叠,而导致蛋白质团聚失效,在原料药生产,生物制剂储存、运输至临床应用的各个环节均应进行产品质量分析检测,全面监控生物技术药物质量品质,保障病患治疗用药的安全、合理和有效。
生物技术药物分析检测主要工作包括药物分析与检验、杂质与安全检验、氨基酸类药物的分析与检验、多肽及蛋白质类药物的分析与检验、酶类药物的分析与检验、脂类药物的分析与检验、核酸类药物的分析与检验、糖类药物的分析与检验、基因工程药物的质量控制。
分析检测方法主要有化学法、仪器分析法及生物检定法。分析检测常规步骤如下:审查→取样→鉴别→检查→含量检测→记录→出具检测报告。
(1)化学法
化学法分析检测生物技术药物组分含量,主要包括重量法和滴定法。重量法是通过精准称取定量待测物,根据相关单质和化合物的质量,计算待测物中目标物质的含量的定量法。滴定法是化学实验室使用的常规方法,测定数据准确但操作繁琐,氨基酸类药物多用滴定法对其含量测定。
(2)仪器分析法
仪器分析的灵敏度较高,用于微量和痕量分析检测,包括光学法、电化学法、色谱法、电泳法、酶法分析法和免疫分析法等。随着现代精密分析仪器不断研究问世,生物技术药物的分析检测手段也愈发精准完备。
a.凝胶电泳法十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)
凝胶电泳法十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)是在蛋白质类生物技术药物常用的分离和检测方法,其迁移速率取决于分子量大小。SDS-PAGE适用于分离和检测分子量为5~500kDa的寡聚蛋白质,该类蛋白质共价键在聚丙烯酰胺环境下较为稳定,通过调节梯度凝胶或特定缓冲体系可以进扩大分子量的检测范围,SDS-PAGE的局限性在于检测范围较窄,由于加热过程可能会导致蛋白质类药物在K12中非正常降解,其定量的准确性欠佳。
b.超速离心法超速离心法(AUC)
超速离心法超速离心法是根据不同生物药物沉降特质(分子形貌、构型、分子量大小有关),通过超速离心机对待测样进行离心分离,检测系统动态监控药物分子的沉降情况,分析检测待测样品的理化性质。沉降平衡法与沉降速率法属于超速离心法范畴。通过沉降平衡法可得到生物药物分子的相关化学计量信息;沉降速率法可得到分子的分子体积和构型等流体力学性质,是寡聚蛋白质检测常用分析方式。
c.光学浊度法
研究表明,散射光的散射角和强度与悬浊液中物质粒径、形貌等参数相关。将生物技术药物配制成悬浮液,测定透过溶液的光的散射程度分析检测药物相关理化参数。浊度法是利用溶液中颗粒悬浮物的Rayleigh散射特性测定溶液浑浊度的方法。生物技术药物的蛋白质类制剂,可通过浊度法快速测定蛋白质的浓度、悬浮粒径的大小,广泛应用于蛋白质液体制剂聚合程度的分析检测。
d.色谱法
色谱法色谱法的优势在于灵敏度高、可精准定量并能够同时检测混合组分中待测物含量,其在分析检测研究中的地位难以取代。高效液相色谱法(HPLC)采用了高效固定相、高压输送流动相和在线检测技术,对生物技术药物进行有效成分分析、鉴定、检测且不影响其分子构型和生化活性。我国在新药临床实验前的审批流程中明文规定:新药的药物代谢动力学实验应首选HPLC检测。
和质谱进行联用LC-MS/MS由于其更高的灵敏度可获得更高效的分离。此外,高分辨质谱也是近年来蛋白分析的利器。
(3)生物检定法
免疫分析法生物技术药物具有免疫原性,这为免疫分析法应用提供相应平台。酶联免疫吸附法(ELISA)精准灵敏、稳定性好、设备自动化程度高、可批量检测、无放射危害是生物技术药物免疫分析中常用的分析方法。
免疫分析法和生物分析法都会受到活性代谢产物、生物基质、血清中抑制因子等因素干扰或特质性限制,无法全面分析检测生物技术药物在生物体内降解过程的完整信息。
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