VIPS + InstiGRO HEK | 一种提高 HEK293 系列细胞系单克隆铺板效率、成活及生长的解决方案！

采用 VIPS 将 4 种不同 HEK 细胞系——293T（ECACC）、HEK293（ECACC）、Expi293F™（Thermo Fisher）以及HEK293 6E（GSK 惠赠）—以单细胞形式铺于 Corning #3596 96 孔板。按照 VIPS 标准流程，向干孔内铺入细胞后，立即通过 Z-stack 液滴成像记录孔内所含细胞数量信息，铺板完成并沉降后，再次进行整孔成像。随后定期拍摄，追踪克隆形成情况，评估不同培养条件下单细胞克隆率（即单细胞长成克隆的百分比）。

第一个关键指标是“铺板效率”。在所有测试细胞中，VIPS 铺板效率平均 80%，与手动极限稀释（LD，0.5 细胞/孔）约 30%的理论铺板率相提高近 3 倍，这意味着获得同样克隆数量可大幅减少所需板数、培养基及工作量。

第二个亮点是 InstiGRO HEK 促单细胞生长添加剂对单细胞存活与克隆扩增的显著促进。通过整孔成像持续追踪克隆形成。图 1 显示，VIPS 铺板的 293T 细胞在添加 InstiGRO HEK 后克隆生长明显增强；图 2 则汇总了各细胞系在补充 InstiGRO HEK 后克隆恢复率提升的百分比。我们发现，InstiGRO HEK 相对于其它添加物，具有显著的提升克隆存活及生长的能力。

不同添加物对克隆生长的影响

我们使用了 4 株不同的 HEK293 细胞分别为 Expi293、293T、HEK293 和 HEK293 6E，进行铺板效率及单克隆成活及恢复的评估。实验证明，使用 VIPS 铺板可以显著提高单克隆的铺板率。VIPS 使用压力小于 1psi 压力对细胞进行分离，大口径的细胞喷嘴不易堵塞，对细胞几乎没有伤害，且铺板可持续性高。其干孔内液滴细胞的成像验证提供铺板后的铺板效率信息，对 Day0 确定单细胞孔有直接的指导意义。结合 Day0 整孔成像，多一层单克隆确证证据，提交监管更具信心。

VIPS 的整板成像功能不但在 Day0 提供高质量的单细胞图像，还能记录克隆生长过程，并能够提供完整的单克隆证据报告。经实验证明，使用 InstiGRO HEK的HEK293 单克隆，相较于其它添加物，成活率更高，生长更快。

因此，使用 VIPS 配合 InstiGRO 对 HEK293 细胞单克隆工艺开发具有显著的优化作用，无论从加速实验流程，缩短试验周期还是从监管符合性方面都是您理想的选择。

此外，在客户的实际应用案例中，该方法对于各种各样的 HEK293 系衍生细胞系均有良好的适用性，能够解决用户的普遍痛点，达到满意的效果。如果您正遇到 HEK293 单克隆分离培养工作上的困难，或者想优化现有的工艺流程，请联系我们，我们会根据您的情况，定制实际解决方案。