No.230 | 《化妆品安全技术规范 2022年版》（征求意见稿）数据分享

普鲁卡因胺等7种原料

参考征求意见稿中普鲁卡因胺等7种原料分析方法，使用色谱柱CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6×250 mm，对标准品进行分析，结果如图1所示。7种标准物质（普鲁卡因胺、苯佐卡因、普鲁卡因、氯普鲁卡因、利多卡因、丁卡因和辛可卡因）的理论塔板数为6448~75040，分离度均大于5.0。

图1 MGII色谱柱分析结果-标准溶液

1. 普鲁卡因胺  2. 苯佐卡因  3. 普鲁卡因  4. 氯普鲁卡因  5. 利多卡因  6. 丁卡因  7. 辛可卡因

【色谱条件】

色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGII S5;4.6×250

流动相：A，磷酸盐缓冲液*；B，甲醇

B% 60%(0min)-60%(6min)-80%(7min)-80%(15min)-60%(16min)-60%(25min)

流速：1.0 mL/min

柱温：30 °C

进样量：5 μL

检测：UV 230 nm

样品：0.05 mg/mL (溶剂为甲醇)

磷酸盐缓冲液*：10 mmol/L磷酸氢二钠溶液，用磷酸调pH至7.0。

图2 水剂样品和水剂加标样品分析图

1.普鲁卡因胺  2.苯佐卡因  3.普鲁卡因  4.氯普鲁卡因  5.利多卡因  6.丁卡因  7.辛可卡因

图3 乳剂样品和乳剂加标样品分析图

1.普鲁卡因胺  2.苯佐卡因  3.普鲁卡因  4.氯普鲁卡因  5.利多卡因  6.丁卡因  7.辛可卡因

表1 样品加标回收率结果

【色谱条件】

色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGII S5;4.6×250

流动相：A：磷酸盐缓冲液*    B：甲醇

B% 60%(0min)-60%(6min)-80%(7min)-80%(15min)-60%(16min)-60%(25min)

流速：1.0 mL / min

柱温：30 °C

进样量：5 μL

检测：UV 230 nm

样品：水剂：称取样品0.5g（精确到0.001g）于10mL具塞比色管中，加入甲醇2mL，涡旋30s，用甲醇定容至刻度，混匀，超声提取20min，以5000r/min离心5min，取上清液经0.45μm滤膜过滤，滤液作为待测溶液。

乳剂：称取样品0.5g（精确到0.001g）于15mL离心管中，加入8mL1%三氯乙酸，2mL乙腈，涡旋1min，5000r/min离心5min，上清液待固相萃取小柱净化。

净化过程：PCX固相萃取小柱依次用3mL甲醇、5mL1%三氯乙酸进行活化。将待净化的样品清夜流经小柱后，用3mL1%甲酸甲醇溶液淋洗小柱，弃去淋洗液，再用10mL的5%氨水甲醇洗脱，收集洗脱液，氮气吹干，用甲醇定容至10mL，经0.45μm滤膜过滤，滤液作为待测溶液。

磷酸盐缓冲液*：10mmol/L磷酸氢二钠溶液，用磷酸调pH至7.0。

图4 普鲁卡因胺等七种原料标准品分析色谱图

【色谱条件】

色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGIII S3;2.0×150

流动相：水/甲醇 = 10/90

流速：0.30 mL/min

柱温：室温

检测：AB SCIEX QTRAP 5500

样品：10 ppb

进样量：2 μL

在上述条件下对化妆水（如图5所示）、乳液化妆品样品进行分析，2种化妆品样品在0.9-1.5 min左右均有不同程度的响应，但经过监测离子的丰度比对比确定2种化妆品样品中均不含普鲁卡因胺等七种物质。

图5 化妆水样品分析色谱图

【样品处理条件】

水剂：称取样品0.5 g（精确到0.001 g）于10 mL具塞比色管中，加入甲醇2 mL，涡旋30 s，用甲醇定容至刻度，混匀，超声提取20 min，以5000 r/min离心5 min，取上清液经0.45 μm滤膜过滤，滤液作为待测溶液。

乳剂：称取样品0.5 g（精确到0.001 g）于15 mL离心管中，加入8 mL1%三氯乙酸，2 mL乙腈，涡旋1 min，5000 r/min离心5 min，上清液待固相萃取小柱净化。

净化过程：PCX固相萃取小柱依次用3 mL甲醇、5 mL1%三氯乙酸进行活化。将待净化的样品清夜流经小柱后，用 3mL1%甲酸甲醇溶液淋洗小柱，弃去淋洗液，再用10 mL的5%氨水甲醇洗脱，收集洗脱液，氮气吹干，用甲醇定容至10 mL，经0.45 μm滤膜过滤，滤液作为待测溶液。

综上，参考《化妆品安全技术规范2022版》（征求意见稿）中的方法，使用CAPCELL PAK MGII C18 S5; 4.6×250 mm色谱柱可以得到良好分析结果，线性、回收率良好。使用CAPCELL PAK C18 MGIII S3; 2.0×150 mm色谱柱，经过LC-MS监测离子的丰度比对比确认化妆品样品中不含普鲁卡因胺等七种禁用物质。

图6 西咪替丁标准谱图（10 µg/mL）

同时我们按照技术规范中要求，在0.2-40 μg/mL浓度范围内测定线性，R2=0.9998，线性良好，同时能够满足检出限要求，线性方程见图7。

图7 线性方程

图8 样品检测结果

【色谱条件】

色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGII S5;4.6×150

流动相：A，乙腈；B，0.05 mol/L 磷酸二氢钾*

流  速：1.0 mL/min

温  度：30 °C

检  测：UV 250 nm

浓  度：标准对照品：储备液：1 mg/mL （甲醇溶解）系列浓度标准品：使用流动相稀释至系列浓度

样品：称取样品1.0 g于25 mL比色管，加入甲醇20mL，涡旋震荡分散，超声20 min，静置至室温，甲醇定容，0.22 µm滤膜过滤。

进样量：10 µL

*0.05 mol/L 磷酸二氢钾溶液：称取磷酸二氢钾6.8g，加水使溶解并稀释至1000mL，用氨水调pH7.0

分析注意事项

（1）原方法中，梯度中有机相最高比例为90%乙腈，但在该比例条件下，会导致流动相B相中的缓冲盐析出，造成仪器及色谱柱的堵塞，建议可适当降低有机相比例进行基质冲洗（本实验调整至65%比例）。

（2）标准品测定中，使用甲醇作为样品溶剂时，色谱峰型会轻微前延，不对称因子在0.8左右，若使用初始比例流动相稀释，则能够获得良好峰型。使用溶剂效应消除器也可以改善前延问题。

（3）本实验室使用较高灵敏度PDA检测器进行检测，线性最大点过载，因此我们对线性范围进行了调整。实际分析中可根据需要选择合适的线性范围。

阳性确认

按照阳性确认的LC-MS法，对西咪替丁标准品及化妆品样品进行分析，结果如图9、10所示，西咪替丁保留时间3.85min，保留及峰形良好，乳液样品中不含西咪替丁。

图9 西咪替丁标准品分析图

图10 乳液样品分析图

【色谱条件】

色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGIII S3;2.0×150

流动相：A，0.02mol/L 醋酸铵+0.1%乙酸溶液；B，乙腈

B% 10%(0min)-80%(8min)-80%(10min)-10%(10.5min)-10%(14min)

流速：0.20 mL/min

柱温：室温

检测：AB SCIEX QTRAP 5500

浓度：标准品，800 ppb；样品，乳液样品

进样量：2 μL

综上，使用CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6×150mm色谱柱可实现技术规范方法下HPLC西咪替丁的检测，同时使用CAPCELL PAK C18 MGIII S3; 2.0×150 mm质谱柱可实现LC-MS阳性确认，得到良好分析结果。

2.17  普鲁卡因胺等7种原料 推荐用柱

F92533 CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6×250

阳性确认 推荐用柱

F92747 CAPCELL PAK C18 MGIII S3; 2.0×150

2.27  西咪替丁 推荐用柱

F92532 CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6×150

阳性确认 推荐用柱

F92747 CAPCELL PAK C18 MGIII S3; 2.0×150

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