又被倒峰难住了？速看各种倒峰的成因

今天小编就给大家分享下：

液相色谱常见的倒峰及其成因和解决方法。

首先我们需要了解几个概念

1、溶剂峰：是指溶解样品的溶剂出的峰。如样品用甲醇溶解，单独进甲醇溶剂的峰即是溶剂峰。

2、空白峰：指的是样品基质本底的出峰情况（即空白基质样品），并不仅仅指溶剂峰。若是简单的小分子极性化合物，溶剂峰和空白峰在谱图上通常无较大区别；而若是蛋白、食品等基质本底干扰不可忽略的样品，空白峰往往比溶剂峰要复杂。

3、水峰：在液相色谱中，水出峰通常是作为溶剂出峰，因此在出峰的时间上通常都是位于溶剂峰的位置（0~5min之间）。峰形上，相比于其他有机溶剂的溶剂峰，水峰多表现为明显的基线波动，甚至为倒峰。

色谱分析中的倒峰，不仅仅局限于水溶剂峰，因此倒峰可能在色谱分析的任何位置出峰。

一般遇到这种情况我们需要看一下是不是检测器的极性设置反了，有时操作工作站软件时不慎改变了极性参数，这种情况我们更改对应的参数即可恢复正常。

高分子聚合物GPC分析

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4、色谱柱异常导致有倒峰的情况。

实验正常进行，冲洗色谱柱后出现倒峰，下面案例中色谱柱为糖柱，流动相洗脱流速为0.6ml/min，但冲柱子时操作人员不慎使用了2ml/min流速，造成色谱柱塌陷，故出现异常倒峰，更换色谱柱即可解决。

5、进样器引入的倒峰情况。

因进样器问题造成的进样时断流，以及进样过程中进入空气或者渗漏等情况也会造成倒峰。

我们平时使用的7725i为不断流设计，更先进的进样器具有样品预压缩技术，使进样过程压力波动和基线波动都更小。

1、溶剂问题

使用紫外检测器时引起倒峰的原因，多为在此波长下有造成负吸收的杂质通过检测器，样品中的杂质没有紫外吸收或吸收很小，而流动相紫外吸收大，如用甲醇时波长设定在220nm以下时，常出现这种情况；常为溶剂峰，流动相的紫外吸收大于样品溶剂的紫外吸收，通常产生倒峰。

用UV检测器时，溶解样品所用的溶剂与流动相溶剂不能互溶或两溶剂pH值不同。当溶剂流过检测池时，光在两种互不相溶的界面上产生折射，从而使光电池接受到不同强度的光，光强度减弱，以至于低于参比，也可出负峰。

解决办法：更换高纯度洁净的色谱溶剂及所需其他试剂。应尽量采用能与流动相互溶的溶剂来溶解样品，最好用流动相作为样品的溶剂。

2、检测器问题

1）检测器极性设置错误。

2）检测器接线错误。

3）接地不良。

解决办法：检查检测器安装及设置。

3、色谱柱问题

解决办法：维护或更换色谱柱。

4、进样器问题

1）进样时出现断流，样品对原有流动相产生瞬间阻断，然后瞬间涌流，所以产生先倒后高的“溶剂峰”。

2）进空气等情况。

解决办法：检查进样器，如进样器无异常，无需处理。

5、示差检测器

样品的折光指数小于流动相溶剂的折光指数。示差折光检测器测的信号是折射率，出现倒峰的原因是组分的折射率小于流动相。

1）组分的折射率小于流动相（通常是水引起的）。

2）密度不同，导致折射率不同。

解决办法：应尽量采用能与流动相溶剂互溶的溶剂来溶解样品，最好用流动相作为样品溶剂。

最后分享一个包治百病的小诀窍：

若色谱运行过程中出现异常峰，建议大家按照先进空针，再进溶剂空白的顺序排查。

若进空针无异常，进溶剂空白也无异常，说明异常峰来源于样品本身（基质本底）。

若进空针无异常，进溶剂空白有异常，说明异常峰来源于溶剂空白。

若进空针有异常，说明异常峰来源于系统污染（包括仪器、管路、进样系统、流动相），或色谱柱污染。 

说明：部分素材来源于网络和数据库。

作者：赵桂芝

排版：赵林

审核：邵锋伟

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