2024-03-15 10:04:15, 仪器事业部 月旭科技(上海)股份有限公司
Hello小伙伴们大家好,我们在做液相色谱分析实验时总会遇到各种问题。如果我们自己掌握了分析、判断和解决问题的能力,就可以免去等待工程师上门的时间。如此,我们的实验工作会更加得心应手。
今天小编就给大家分享下:
液相色谱常见的倒峰及其成因和解决方法。
1
术语解释
首先我们需要了解几个概念
1、溶剂峰:是指溶解样品的溶剂出的峰。如样品用甲醇溶解,单独进甲醇溶剂的峰即是溶剂峰。
2、空白峰:指的是样品基质本底的出峰情况(即空白基质样品),并不仅仅指溶剂峰。若是简单的小分子极性化合物,溶剂峰和空白峰在谱图上通常无较大区别;而若是蛋白、食品等基质本底干扰不可忽略的样品,空白峰往往比溶剂峰要复杂。
3、水峰:在液相色谱中,水出峰通常是作为溶剂出峰,因此在出峰的时间上通常都是位于溶剂峰的位置(0~5min之间)。峰形上,相比于其他有机溶剂的溶剂峰,水峰多表现为明显的基线波动,甚至为倒峰。
色谱分析中的倒峰,不仅仅局限于水溶剂峰,因此倒峰可能在色谱分析的任何位置出峰。
接下来我们举例说明不同倒峰的具体成因,
快准备好你的小本本吧。
2
案例分析
1、所有峰均为倒峰
有用户反馈之前色谱图正常,某天突然不正常,所有峰都是倒峰,如下图所示:
用户1(UV-VIS)
用户2(UV-VIS)
用户3(RID)
一般遇到这种情况我们需要看一下是不是检测器的极性设置反了,有时操作工作站软件时不慎改变了极性参数,这种情况我们更改对应的参数即可恢复正常。
2、示差检测器出现倒峰
1)不影响积分,无需处理的情况。
高分子聚合物GPC分析
(Adv.Funct. Mater. 2018,1806567)此处主要表征聚合物的分子量。20min出峰为主要的聚合物峰,数均摩尔质量为26370g/moL;30-35min出峰主要为洗脱溶剂。
高分子聚合物GPC分析
(Adv.Funct. Mater. 2018,1806567)此处主要表征聚合物的分子量。20min出峰为主要的聚合物峰,数均摩尔质量为9956g/moL;30-35min出峰主要为洗脱溶剂。
上述两个应用案例中倒峰为溶剂峰,并不影响我们积分,对结果分析无影响,可以不做处理。
溶剂峰不一定只在进样运行初期出现,也可能在主峰后出现。
2)影响积分,需排查的情况。
某客户使用流动相是0.1mol硝酸钠溶液,含0.02%的抑菌剂,样品稀释剂和空白都是流动相。反馈空白有干扰,影响样品出峰及分析结果,这种情况我们就需要排查处理了。
经过重新配置流动相,重新平衡系统,置换RID参比池中的溶剂后,结果正常。
如果不是溶剂及流动相的问题,这时需要调整方法使倒峰与我们的主峰分开,不影响我们数据处理积分即可。
3、更换流动相后出现倒峰的情况。
之前实验正常,在更换了流动相后,出现异常。考虑溶剂污染的可能,故启用新的溶剂重新配置流动相后,峰形恢复正常,说明溶剂污染存在有负吸收的物质所致。
4、色谱柱异常导致有倒峰的情况。
实验正常进行,冲洗色谱柱后出现倒峰,下面案例中色谱柱为糖柱,流动相洗脱流速为0.6ml/min,但冲柱子时操作人员不慎使用了2ml/min流速,造成色谱柱塌陷,故出现异常倒峰,更换色谱柱即可解决。
5、进样器引入的倒峰情况。
因进样器问题造成的进样时断流,以及进样过程中进入空气或者渗漏等情况也会造成倒峰。
我们平时使用的7725i为不断流设计,更先进的进样器具有样品预压缩技术,使进样过程压力波动和基线波动都更小。
进样阀造成的倒峰
3
倒峰出现的原因及解决方法小结
1、溶剂问题
使用紫外检测器时引起倒峰的原因,多为在此波长下有造成负吸收的杂质通过检测器,样品中的杂质没有紫外吸收或吸收很小,而流动相紫外吸收大,如用甲醇时波长设定在220nm以下时,常出现这种情况;常为溶剂峰,流动相的紫外吸收大于样品溶剂的紫外吸收,通常产生倒峰。
用UV检测器时,溶解样品所用的溶剂与流动相溶剂不能互溶或两溶剂pH值不同。当溶剂流过检测池时,光在两种互不相溶的界面上产生折射,从而使光电池接受到不同强度的光,光强度减弱,以至于低于参比,也可出负峰。
解决办法:更换高纯度洁净的色谱溶剂及所需其他试剂。应尽量采用能与流动相互溶的溶剂来溶解样品,最好用流动相作为样品的溶剂。
2、检测器问题
1)检测器极性设置错误。
2)检测器接线错误。
3)接地不良。
解决办法:检查检测器安装及设置。
3、色谱柱问题
解决办法:维护或更换色谱柱。
4、进样器问题
1)进样时出现断流,样品对原有流动相产生瞬间阻断,然后瞬间涌流,所以产生先倒后高的“溶剂峰”。
2)进空气等情况。
解决办法:检查进样器,如进样器无异常,无需处理。
5、示差检测器
样品的折光指数小于流动相溶剂的折光指数。示差折光检测器测的信号是折射率,出现倒峰的原因是组分的折射率小于流动相。
1)组分的折射率小于流动相(通常是水引起的)。
2)密度不同,导致折射率不同。
解决办法:应尽量采用能与流动相溶剂互溶的溶剂来溶解样品,最好用流动相作为样品溶剂。
最后分享一个包治百病的小诀窍:
若色谱运行过程中出现异常峰,建议大家按照先进空针,再进溶剂空白的顺序排查。
若进空针无异常,进溶剂空白也无异常,说明异常峰来源于样品本身(基质本底)。
若进空针无异常,进溶剂空白有异常,说明异常峰来源于溶剂空白。
若进空针有异常,说明异常峰来源于系统污染(包括仪器、管路、进样系统、流动相),或色谱柱污染。
说明:部分素材来源于网络和数据库。
作者:赵桂芝
排版:赵林
审核:邵锋伟
如果您想了解更多内容,欢迎联系月旭科技销售人员或拨打400-810-6969服务热线,我们将竭诚为您服务。
07-01 英斯特朗
连载 | 药物一致性评价与粒度分析(三)07-01 欧美克仪器
【仪器百科】LS-909丨干湿二合一激光粒度分析仪07-01 欧美克仪器
标准物质解决方案 | PFASs(全氟及多氟化合物)06-29
第九期阿尔塔有约 | 环境专题【新污染物:PFAS】技术研讨会精彩回顾及提问解答06-29
“绿色技术范式”,分析化学未来发展方向——访中国分析测试协会副理事长、辽宁省分析科学研究院原院长刘成雁教授06-29 转载仪器信息网
华西医院-标准型数显脑立体定位仪、双通道体温维持仪、体式显微镜安装完成06-29 迈越生物
科鉴检测助力2家仪器企业获得首批产品可靠性认证证书06-28 科鉴检测
德国耶拿:锂电池生命周期分析解决方案06-28 德国耶拿
AI已来!生命科学本科教学如何紧跟技术浪潮06-28 Opentrons
盛瀚售后,五星级服务的秘诀是什么?06-28 SHINE
专为汽车制造商打造的柔性解决方案——实现制程控制06-28
西北工业大学-脑立体定位仪安装完成06-28 迈越生物
会议邀请 | 第九届海上检验医师论坛06-28
卓立要闻 | 创新发展ing…6月卓立“大事小情”速览06-28 光电行业都会关注
打造信任合作伙伴!2024年度卓立汉光客户满意度调查开启06-28 光电行业都会关注
如何挑选适用于三阶光学非线性的测量系统?Z扫描测量系统来助力!06-28 光电行业都会关注
招聘启事—中国科学院沈阳自动化研究所微纳光学测量表征技术课题组06-28 光电行业都会关注
谱育科技作为主要完成方 荣获2023年度国家科学技术进步一等奖和二等奖06-28 点击关注→
仪器原理丨顶空仪与吹扫捕集仪科普小知识06-28 天美色谱