TriVersa NanoMate 多通道纳喷源 Q&A 第3期

01/ TriVersa NanoMate 多通道纳喷源 Q&A 第1期

02/ LESA/TVNM 芯片多通道纳喷源 Q&A 第2期

1、 TriVersa NanoMate 如何实现肽段的表征？

TriVersa NanoMate（TVNM/LESA 多通道纳喷源）可进行纳升电喷雾电离，比传统纳喷高出数倍的电场强度使被分析物的离子化效果明显提升；同时 TVNM 更耐盐，能大大降低离子竞争和抑制。

蛋白酶解（可自动化原位酶解或使用传统酶解方法）后的肽段，无论是经由 nanoLC 分离后进入 TVNM 离子源实现纳升液相质谱联用（即，nanoLC-TVNM-MS 模式）、亦或直接以鸟枪法注射同时利用 TVNM 的离子化进入质谱仪（即，DIMS 模式），经 MS 测定精确分子量，MS/MS 进行二级碎裂后，得到母离子及碎片子离子峰，进而实现对多肽及其结构（如氧化、甲基化等翻译后修饰）的鉴定表征。

TVNM 自带含400个喷嘴的芯片，兼容96或384孔样品盘，能够实现大量样品的自动化检测。芯片有三种规格，分别为2.5 μm、4 μm 和5.5 μm。

推荐进样体积2 μL-5 μL，即使样品量很少也不影响检测。

若是经表达（如大肠杆菌）提取出的蛋白，需进行蛋白的纯化（如使用镍柱等亲和层析柱），浓缩后贮存于-80℃ 下。

但也有文献表明在检测蛋白非共价键相互作用时，即使有少量干扰物的存在（如其它蛋白、蛋白混合物、细菌细胞裂解液等）也可以检测到蛋白-配体复合物。

TVNM 基于纳升电喷雾（nanoESI）原理，形成纳米级尺度的喷雾，灵敏度比传统 ESI 喷雾高出1-3个数量级。

同时 TVNM 通过自回路电场和硅基喷雾芯片的设计，利用喷嘴处的强电场，可以对 μL 级样品实现高效的电离，并产生稳定持久的喷雾，显著提升离子化效率。

尤其对高水含量和含缓冲液 Buffer 的抗体药及偶联物 ADCs 等的离子化效率极高，能获取传统 nanoESI 难以生成的质谱信号。

LESA 液滴萃取表面分析作为新型的质谱进样形式，非常适合对复杂样本（尤其是组学样本）进行高通量分析。

除必要的清洁和脱脂外，一般无需复杂前处理，可充分发挥高端质谱仪，尤其是高分辨质谱和串联质谱的强大功能，发掘样品中丰富的信息。

LESA 通过常规的有机溶剂进行萃取，利用溶剂的选择性萃取出不同类型的化合物。此外 TVNM 每测完一个样品后，会自动更换喷嘴，不会产生交叉污染。

当然，若在线 nanoLC-nanoESI-MS 模式是必须的，则此时的 TVNM （宰牛刀）类似于仅仅行使了 nanoESI 源的单一功能；其他功能闲置。

若期待对经过 LESA 萃取后的液滴继续分离，可采用 LESAplus 模式，即，LESA 后加除盐柱和短柱继续分离，再行芯片纳喷电离和质谱检测。

TVNM 仍然遵循基本的定量理论。定量一般分为相对定量和绝对定量，定量方法可分：外标法、内标法和同位素标记内标法。

若使用外标法，需要有标准物质，在被测物浓度范围内建立标准曲线，并进行定量方法学验证，最后代入被测物质的信号强度测定其含量。

若使用内标法（相对定量），可以使用与待测物质性质相近的另一类物质（离子化效果相似，最好是同系物），或同位素标记内标（绝对定量）进行被测物的定量。

TVNM/LESA 仍需要现有的质谱工作站。它可以与主流质谱厂商，如 Thermo、Agilent、SCIEX、Waters 等不同型号的质谱进行联接，质谱的控制与数据采集仍通过质谱工作站进行，TVNM/LESA 操控通过 Advion 自研的 ChipSoft 软件进行。

针对不同类型的化合物，萃取溶剂也不同。萃取用的溶剂大多为两种或三种不同的有机相按一定比例配制：

如对蛋白，一般采用乙腈-水（50-50，含 1% 甲酸）的组合；

对脂质，一般采用氯仿、甲醇和异丙醇的组合；

对药物等小分子，则采用甲醇/乙腈-水（60-40，含 0.1% FA 甲酸）的组合。

具体的比例可自行优化或参考已发表的文献。

邮箱：info@aspectechnologies.com

往期推荐

TriVersa NanoMate 多通道纳喷源 Q&A 第1期

Nat. Protoc. 推荐！LESA/TVNM 芯片多通道纳喷源 Q&A 第2期

中科院大化所基于纳喷机器人原位质谱法的非靶代谢组学新发现

持续了解，请关注我们：