2023-05-31 10:57:23, Tracy Li Merck工艺解决方案
随着中国生物制药企业越来越多的药物管线进入临床后期,大规模生产变得越来越普遍。深层过滤作为料液处理的第一步,保障其顺利进行对后续的生产工艺至关重要。在进行澄清放大时,需要考虑多种因素,尽量避免大规模生产时,因上游和澄清工艺的不稳定性因素而产生的风险,包括:
· 载量衰减,出现压力骤增的现象,导致所需膜包数量增加
· 澄清后料液的浊度过高,下一步骤的除菌过滤器过早发生了堵塞,导致除菌过滤器用量增加
如发生上述问题,可能的原因包括操作不当,小规模实验结果不能代表大规模生产,安全系数设置不当,以及小试膜包的放大性不佳等。本文将介绍如何预防及解决这些潜在问题,降低后续生产工艺中的风险。
让小试表现具有代表性
减少泵管中颗粒沉降
在高密度细胞液进液的时候,可能有部分颗粒沉降在管路内部,没有进入到深层过滤器内部(如图1)。这种情况可能会使小试载量过高,从而低估了膜包使用量。
图1
颗粒在进料管路内的沉降量与停留时间和沉降距离(即管路直径)直接相关。为此,默克使用CHO细胞收获液研究了不同停留时间下,细胞收获液颗粒在管道中损失量。使用了内径为1/16, 1/8, 1/4英寸的泵管研究,测量从管路中通过的生物量,与初始进料料液比较。选择在进料后的20、40和60分钟三个时间点测量,因为较长的时间可以让流路体系达到稳定状态。
图2
结果显示(图2)当停留时间少于1分钟,料液不会在进料管路内沉降。基于此标准,默克推荐在小试过程中使用1/16和1/8英寸内径泵管,以及对应的最大管长供参考(表1),避免出现颗粒沉降而导致膜包预计不准确。在常规的操作通量下,一般不推荐使用1/4英寸内径的管路。
表1
选择合适的进料通量
为了节省细胞培养液的体积,并尽量缩短试验时间,深层过滤器的小试实验通常需要确定一个合适的通量,来判断其过滤表现。默克使用CHO细胞收获液(mAb02,18.1x106 TC/mL,活率68%)和Millistak+® HC Pro D0SP 小膜包以评估通量对载量的影响,通量选择75,150和300LMH,进行小试实验。
图3
结果显示(图3),通量变化,载量和浊度趋势也发生了变化。小试测试时,通常推荐使用100-150LMH作为进料通量区间,以达到最佳过滤效果。与此同时,考虑到通量变化对载量结果的影响,选择小试实验所用通量时,需要同步考虑放大之后实际操作的通量参数,不应偏差过大。
安全系数的设置
澄清这一步骤中存在较多不稳定的因素,合理的安全系数的设置,可以帮助应对多因素变化带来的工艺偏差,包括:
· 膜包:不同规格的膜包具有流体分配和滞留体积差异,因此放大之后,膜包表现会有所差异;此外,不同批次的深层过滤膜包之间也可能出现表现差异。要求膜包生产商对于批间差的控制能力较高。
· 料液:不同批次的收获液的料液特性会有所区别,导致过滤性能差异。
· 人员操作:不同人员操作习惯可能也会带来工艺表现的差异。
通常建议使用1.2-1.6的安全系数,来应对上述出现的变量1,2。安全系数的设置直接影响膜包使用面积(表2),需平衡有效性和成本。选择放大性较好、严格控制批间差的膜包,加强人员操作培训等措施,可以减小所需的安全系数,降低成本和风险。
表2
选用放大性好的膜包
从小规模到大规模,保持膜包设计一致性,对于放大性极为重要。一致性主要在于以下两方面:
膜包介质:小试膜包和生产规模膜包,应使用完全一致的过滤介质,并且过滤介质遵循一致的放行标准。
内部结构:应保持一致的流路设计和流体分配,否则可能会引起膜包内位点压力变化,导致不一样的过滤性能表现。
默克的小试膜包与大规模膜包使用一致的过滤介质,内部结构设计一致,提供优秀的放大性能。使用CHO细胞收获液(mAb02,20.5 x 106 TC/mL,92%活率)进行深层过滤的放大性测试,记录Millistak+® HC Pro D0SP 小试膜包和0.11 m2的生产规模膜包的阻力曲线和浊度,结果如下图。各组压力和浊度趋势类似,当过滤量达到175L/m2时,压力未达到上限,但浊度明显上升,小试膜包和生产规模膜包的测试载量差异<10%。
图4
由测试数据可知,小试膜包的载量与大规模膜包的差异较小,其过滤性能具有代表性,体现出较好的放大性能,能精确预测生产规模所需膜面积。
选择高质量体系保障的膜包:
提供膜包批次间稳定
默克深层过滤膜包生产过程中遵循完善、先进的质量体系管理,不同批次的膜包展现出优异的稳定性,在常规的安全系数下,能够在生产规模上提供稳健的过滤性能。
默克Emprove®文件体系整合了关于产品质量的一系列文件,为用户提供质量保证。用户可通过官网搜索产品,订阅下载Emprove®文件,获取上述信息。
总结
本文浅谈了如何从多个方面评估提高深层过滤安全放大的质量,包括小试实验管径和通量选择的最佳实践分享。基于不稳定因素的考虑,选择适合的安全系数,放大性优异的膜包,能够帮助准确估计深层过滤膜包用量。配备高水平的质量保证体系,提供膜包批间表现稳定性,减少用户后顾之忧!
参考文献
1. Lutz, H., Chefer, K., Felo, M., Cacace, B., Hove, S., Wang, B.,Blanchard, M., Oulundsen, G., Piper, R., & Zhao, X. (2015).Robust depth filter sizing for centrate clarification. Biotechnology Progress, 31, 1542–1550.
2. Dryden, W. A., Larsen, L. M., Britt, D. W., & Smith, M. T. (2021). Technical and economic considerations of cell culture harvest and clarification technologies. Biochemical Engineering Journal, 167, 107892.
3. 技术资料Millistak+® HC和Millistak+® HC Pro Micro 20放大性研究
关于默克工艺解决方案
默克工艺解决方案,凭借可信赖的产品、丰富的生物制药工艺专业知识和卓越的法规支持,为生物制药客户提供全方位支持,以应对各种工艺挑战。
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