用于小分子药物生物分析的高质量色谱体系

注 意：

注射器速度设置为正常，速度系数设置为1。SCIEX ExionLC™ 2.0系统自动进样器用于标准配置，包括250μL注射器、100μL样品定量环、250μL缓冲管和15μL毛细管。对于所有进样，选择μLpick-up plus模式是为了在优化样品消耗的同时最大限度地缩短进样周期时间。使用了5μL的进样体积。ExionLC™ 2.0系统自动进样器在高级冲洗模式下运行，使用2mL含0.1%甲酸的100%异丙醇作为清洗溶剂，清洗顺序包括2次阀清洗。

图1显示了氟西汀在50次进样中的保留时间重现性，突出了ExionLC™ 2.0系统产生的梯度的稳定性和Kinetex^® C18色谱柱的重现性。在这些进样的保留时间范围内，每种分析物的保留时间精度小于1%RSD。甲氧苄啶、磺胺甲恶唑、卡马西平和氟西汀的保留时间偏差%RSD分别为0.40、0.10、0.06和0.07，所有化合物的最大保留时间差异小于1秒。std 8（20ng/mL）的色谱图示例如图2所示，其中实现了化合物的良好分离。请注意核壳型Kinetex^® C18色谱柱提供的出色峰形（对称性）和窄峰宽（效率）。基质中每种分析物的LLOQ根据当前生物分析方法指南确定：最低标准浓度的精度<20%，准确度在80%和120%之间，响应（峰面积）至少是基质空白的5倍。表2列出了每种分析物达到的定量限和每种分析物的校准曲线范围。校准样品如图3所示。使用1/x加权的线性回归。所有化合物的线性系数（r²）都高于0.99。校准标准的准确度和精密度如表3所示。当分析血浆中的这些小分子药物时，本研究中测试的浓度范围涵盖了典型的线性动态范围要求。图4显示了从提取的血浆标准品和空白中提取的磺胺甲恶唑的离子色谱图。标准品10（200 ng/mL）后的空白进样显示未检测到残留峰，表明所使用的简单快速的自动进样器清洗序列为检测要求提供了可接受的残留性能。

ExionLC™ 2.0系统与高重现性、高效的核壳柱（Kinetex^® 1.7μm C18）联用，已被证明是一种稳定的UHPLC体系，非常适合于血浆基质中小分子药物的生物分析。精确稳定的溶剂流量，保留时间偏差小于1%。准确和精确的定量结果，测定性能的线性系数（r²>0.99）和测试浓度范围的精密度<15%变异系数，这是小分子药物生物分析的典型结果。