划重点！液相流动相使用的那些事儿

液相色谱是实验室使用频率非常高的仪器设备，在使用过程中会有许多小技巧和注意事项，今天小编就跟大家一起扒一扒流动相使用的那些事儿。

从上图我们可以看出来，流动相在整个液相系统中起着重要的作用，类似我们身体的血液，起着运输的作用，关于流动相那些事儿，我们一起来看看吧。

一般先用90%的乙腈（或甲醇）/水（或缓冲溶液）进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂（乙腈或甲醇）的比例。

每减少10%的有机溶剂（甲醇或乙腈）的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。这是一个较为省力的办法。调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。

当分离达到一定合适的程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整幅度，直至各组分的分离情况最为理想。

采用反相色谱法分离弱酸（3≤pK_a≤7）或弱碱（7≤pK_a≤8）样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的K值越大，当pH值远远小于弱酸的pK_a值时，弱酸主要以分子形式存在；对弱碱，情况相反。分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液；分析弱碱样品时，通常在流动相中加入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。

卤代溶剂可能含有微量的酸性杂质，能与HPLC系统中的不锈钢反应。卤代溶剂与水的混合物比较容易分解，不能存放太久。卤代溶剂(如，CCL₄、CHCL₃等）与各种醚类（如，乙醚、二异丙醚、四氢呋喃等）混合后，可能会反应生成一些对不锈钢有较大腐蚀性的产物，这种混合流动相应尽量不采用，或新鲜配制。此外，卤代溶剂（如CH₂CL₂）与一些反应性有机溶剂（如乙腈）混合静置时，还会产生结晶。总之，卤代溶剂最好新鲜配制使用。如果是和干燥的饱和烷烃混合，则不会产生类似问题。

选择微孔滤膜时，首先要考虑化学兼容性。滤膜是否耐酸、碱、有机溶剂等。几种常见滤膜的特性及应用如下所示：

特性：亲水性、高流速、高通量、低蛋白吸附、低溶出物、耐高压灭菌。

应用：一般试剂，样品的实验室过滤；超纯水、食品、饮料等的过滤；血清样品的过滤。

特性：亲水性、低吸附能力、低非特异性结合能力、热稳定性。

应用：蛋白质和酶过滤；样品前处理过滤中最为广泛使用的滤膜之一。

特性：亲水性、高流速、由硝酸纤维素和醋酸纤维素混合而成。

应用：微生物和颗粒分析；无菌测试。

特性：亲水性、耐弱酸、高蛋白结合能力。

应用：微生物检测与捕获等；微量元素分析等；医学研究及诊断方面的生物工程，生化分析等。

特性：疏水性、高灵敏度、机械强度高、蛋白吸附低、具有良好的耐热性及化学稳定性。

应用：气体及蒸汽过滤， 高温液体过滤，溶剂和化学原料的净化过滤；油类中不溶物的净化；化学物质的分离和提纯。

特性：疏水性、具有广泛的化学兼容性、耐温性好、抗强酸强碱、化学腐蚀性较强的溶剂及氧化剂。

应用：化工、医药、食品、能源等领域，几乎能过滤所有的有机溶液；强酸和强碱的过滤；高温液体的过滤；特殊化学试剂的过滤；气体的澄清过滤。

特性：亲水性、耐温性能好、强度高、化学稳定性好、耐稀酸稀碱等。

应用：样品的除菌，过滤；工业水的过滤。

特性：耐酸碱、耐磨损、耐冲击、微孔分布均匀、过滤面积大、透水性好。

应用：在药品、饮料、日常用水、废水、空气过滤等方面广泛应用。

具体实验中，应该根据您的过滤目的实验需求来选择合适的孔径的滤膜和滤器。

0.1μm: 能去除样品中的支原体。

0.2μm：可以去除99.99%的细菌微生物，达到GMP或者药典的除菌要求，还可以去除样品、流动相中极细微的颗粒。

0.45μm: 能滤除大多数细菌微生物，对常规样品、流动相等的过滤，能满足一般色谱要求。

0.8μm及以上：可以过滤较大颗粒的杂质或者难处理、浑浊样品的预处理，经预处理后再选择相应滤膜进行过滤。

对于水相溶液来说，首要的问题是防止污染。对于溶剂瓶我们要做的非常重要的工作就是勤换流动相，常换常新，夏天对于纯水或者纯盐流动相可以配置后放入冰箱冷藏，临时用放置至室温。

对于有机相溶液，可以不用担心细菌繁殖的问题。但是有机相容易发生聚合，特别是乙腈在适宜的光照条件下极易发生聚合，瓶子里就会出现一些絮状的聚合沉淀物。为了防止聚合过程的发生，装乙腈时要用棕色的溶剂瓶，避免阳光直射，更换乙腈时应当弃去瓶底剩余的溶液。

溶剂瓶里的过滤头，其作用是为了防止溶液瓶中的颗粒杂质进入到仪器的流路系统中，它的材质通常分为玻璃烧结石英或不锈钢，如果不慎堵塞会造成流动相吸液不畅，在管路中造成气泡，需进行清洗，玻璃材质的通常是用稀硝酸泡，而不锈钢材质的可以直接进行超声清洗。