那么少也可以！微量兴奋剂检测--Digital Western案例分析

    使用Digital Western技术平台（Simple Western），ActRIIA-Fc 和ActRIIB-Fc分子量分别是78kDa和84kDa，而药物Luspatercept的分子量为82kDa，Sotatercept的分子量为76kDa。将每孔上样量固定为5μL时，研究人员通过线性稀释方式，调整两种蛋白的含量，由50pg下调到0.39pg，测得两者的最低检测剂量分别为1.56pg和3.12pg。

    此外，前期研究的样品量起始体积约为50-300μL，本研究中所有的血清和血浆样本检测的初始体积取了中位数100μL。因为体积上升至200-500μL时，检测的灵敏度并不会提升。实验结果显示，ActRIIA-Fc在血清样本中LOD值为0.1ng/mL，而ActRIIB-Fc是0.05ng/mL。

    研究人员还测试了干血点兴奋剂检测技术（Dry Blood Spots，DBS），这项技术对运动员比较友好，价格不昂贵，也方便样本的运输。结果显示，ActRIIA-Fc在3.12ng/mL的浓度下就可以被检测到，ActRIIB-Fc在1.0ng/mL可被检测到。

    总体来看使用Digital Western技术的LOD值比以往的SDS-PAGE、SAR-PAGE、IEF和质谱技术平台都要更低，灵敏度更高。

    为了验证方法的特异性，也确认来自互相作用的信号不会干扰2种样本的测试结果，研究人员还检测了10个血浆和10个血清的样本。每次检测都添加内参，并控制样本浓度为1.0ng/mL和2.0ng/mL。结果显示，从血浆和血清提取出的ActRIIA-Fc 和ActRIIB-Fc没有互相干扰的信号。为了进一步验证该方法，研究人员还测试了浓度范围为0.2-2.5ng/mL的ActRIIA-Fc 或ActRIIB-Fc，测得的CV值分别为16.4%和11.5%。

    除了使用BAF339和BAF340这两种抗体外，研究人员还测试了其余10种商业化蛋白抗体的结合情况。结果显示，EP7407可以特异性结合ActRIIA-Fc，而MAB3392、DPAB-L21507和A0856-10B和ActRIIB-Fc的结合情况也很好。这拓宽了在实际检测中的便利性。

①此类兴奋剂检测使用Digital Western技术LOD值比以往的SDS-PAGE、SAR-PAGE、IEF和质谱技术平台都要更低，灵敏度更高。使用该方法，6-7小时就可以完成20个样本的检测。

②该方法不仅可应用于全血样本，还同时可应用于血清样本、血浆样本和DBS样本。同时，抗体不限定于使用一家公司，提高了检测的便利性。

③该研究提示Digital Western技术用于日常的兴奋剂检测，用于融合蛋白检测可能存在巨大潜力。