No.55 | 三聚氰胺相关数据合集

大阪曹達｜三耀精细

三聚氰胺相关数据合集

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前言

目  录

一. 《GB/T 22388-2008 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》

第一法 CAPCELL PAK C18 MG

第二法 CAPCELL PAK CR 1:4（方法推荐）

二. 三聚氰胺与双氰胺的分析

CAPCELL PAK ADME

CAPCELL PAK NH2

三. 乳制品中三聚氰酸的LC/MS分析

PC HILIC、CAPCELL CORE PC

*本文阅读时间大约需要10分钟

一、GB/T 22388-2008

原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法

三聚氰胺俗称蜜胺、蛋白精，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，为重要的氮杂环有机化工原料。三聚氰胺进入人体后，发生取代反应（水解），生成三聚氰酸。三聚氰酸和三聚氰胺形成大的网状结构，产生结石。

2008年9月，中国爆发了“三鹿”婴幼儿奶粉受污染事件，导致食用受污染奶粉的婴幼儿产生肾结石病症，其原因就是奶粉中含有过量的三聚氰胺。¹

三聚氰胺

Melamine

M.W. :126.12

《GB/T 22388-2008 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》使用液相方法的分别为：

第一法：HPLC法（流动相含离子对试剂）

第二法：LC-MS/MS法 ——推荐使用大阪曹達CAPCELL PAK CR 1:4色谱柱

第一法

如图1，根据《GB/T 22388-2008 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》第一法（HPLC法+离子对试剂），使用大阪曹達通用型色谱柱CAPCELL PAK C18 MG色谱柱进行分析能得到良好分析结果，三聚氰胺保留时间为17 min左右，比标准图谱中使用C8色谱柱所得结果（13.6 min）保留更强。

▲图1 CAPCELL PAK C18 MG分析所得结果

HPLC Conditions:

▲GB/T 22388-2008 第一法 标准图谱（添加离子对）

第二法

根据第二法：液相色谱-质谱/质谱法（LC-MS/MS），推荐使用大曹三耀独特的强阳离子交换与反相C18混合填料色谱柱CAPCELL PAK CR 1:4进行三聚氰胺的LC-MS/MS分析。

▲GB/T 22388-2008 第二法

▲GB/T 22388-2008 第二法 标准图谱

（CAPCELL PAK CR 1:4 色谱柱）

CAPCELL PAK CR

CAPCELL PAK CR色谱柱是一款阳离子交换辅助型C18色谱柱。对多种碱性化合物进行同时分析时，能同时兼顾对保留和MS检测灵敏度的要求。

★ 强阳离子交换SCX与C18混合

★ 具有独特分离模式

★ 适合于LC-MS的高灵敏度离子化合物分析

★ 可对酸性、中性、碱性化合物进行同时保留

★ 有3种混合比例可供选择

*与武田制药共同开发

通过调整流动相的盐浓度，可在离子交换作用下针对碱性化合物的保留程度进行调整，从而改变分离模式，达到不同极性化合物同时分析的效果。

二、三聚氰胺与双氰胺的分析

三聚氰胺和双氰胺原本是和合成树脂生产相关的物质，而现在却被无良商家混入到饮料及食品中，以增加蛋白质含量检测数值，危害公众健康，非法牟利。

三聚氰胺

Melamine

M.W. :126.12

双氰胺

Dicyandiamide

M.W. : 84.08

由于这两种化合物都含有较多氮原子，使用常规C18色谱柱在简单流动相条件下，无法得到充分保留及良好峰形。

通常采用的做法是，在流动相中添加离子对试剂增强保留，或者按照国家标准，使用大阪曹達独特的CAPCELL PAK CR 1:4色谱柱进行分析。

为了丰富分析方法，提供更多色谱柱选择，我们也尝试了其它色谱柱的分离保留模式，实现对这两种化合物的保留与分离。

如图2，使用键合独特金刚烷基团的CAPCELL PAK ADME色谱柱，在简单的2%甲醇条件下即可实现三聚氰胺和双氰胺的良好保留与分离。这得益于ADME色谱柱独特的表面极性与保留模式。

▲图2  CAPCELL PAK ADME分析所得色谱图

*峰1：双氰胺，峰2：三聚氰胺

HPLC Conditions:

CAPCELL PAK ADME

CAPCELL PAK ADME色谱柱是一款键合立体笼状金刚烷基官能团，具有超高表面极性，同时兼顾一定疏水性的色谱柱，从强极性化合物到疏水性化合物的复杂组分样品能同时得到良好保留与分离。

★ 立体笼状金刚烷基官能团——独特的独特的表面极性与疏水性平衡

★ 高表面极性——对强极性化合物的良好保留

★ 兼顾一定疏水性——从极性到疏水性化合物的共同分析

★ 立体选择性——空间异构体拆分能力

如图3，使用氨基柱CAPCELL PAK NH2 UG80色谱柱进行分析，在磷酸缓冲盐/乙腈等度条件下，也能得到三聚氰胺和双氰胺的良好保留与分离。

▲图3 CAPCELL PAK NH2分析所得色谱图

*峰1：双氰胺，峰2：三聚氰胺

HPLC Conditions:

CAPCELL PAK NH2 UG80

CAPCELL PAK NH2 UG80色谱柱是一款在聚合物包被后的硅胶上导入多元胺、形成含有一级氨基构造的氨基色谱柱。

★ 有弱阴离子交换和HILIC两种模式

★ 独特的桥基键合，使其与其他氨基柱相比耐久性更佳

在采用UG系列填料的色谱柱中，CAPCELL PAK NH2 UG80色谱柱极性最强。

1. 常用于糖类、脂溶性维生素等物质的正相分离；

2. 作为弱阴离子交换色谱柱，在酸性流动相条件下填料表面带正电荷，适用于水溶性维生素或核苷酸类的分析。

三、乳制品中三聚氰酸的LC/MS分析

三聚氰酸是氰酸（HOCN）的环状三聚体，又称“氰尿酸”，属于三嗪类化合物。它有多个互变异构体，三酚形式和三酮形式，三聚氰酸分子主要是以三酮形式存在，溶液中单羟基形式也可以少量存在。

三聚氰酸

Cyanuric acid

M.W. :129.07

客户提供乳制品中三聚氰酸内标样品及标准品，希望本实验室筛选合适的色谱柱进行LC-MS方法的开发。

由于三聚氰酸极性较强，首先使用亲水性相互作用色谱柱——PC HILIC进行尝试。

如图4、图5，按照客户提供的质谱参数条件，使用PC HILIC色谱柱在10 mM甲酸铵 / 乙腈体系下分别对客户提供的外标（三聚氰酸）和内标样品进行分析。在0.3 mL/min流速条件下，三聚氰酸及内标能够得到充分保留和良好峰形，保留时间为1.8 min左右。

▲图4 PC HILIC外标LC/MS分析色谱图

▲图5 PC HILIC内标LC/MS分析色谱图

HPLC Conditions:

PC HILIC

亲水性相互作用色谱法（HILIC）是针对在常规C18色谱柱上保留较弱的强亲水性物质的保留方法。

在HILIC模式下，通过键合极性官能团的固定相与反相模式常用的CH3CN / H2O系流动相的组合，对亲水性化合物进行保留与分离。因此，HILIC是在HPLC的分离模式中最常使用的反相模式的反相，故也被称为“反反相模式”。

大阪曹達独立研发合成了卵磷脂的亲水性部位——PC基团（磷酸胆碱基团）作为PC HILIC色谱柱的官能团，对亲水性化合物的保留具有优势。

PC HILIC 键合相示意图

为使峰形更尖锐，使用同样键合PC基团、柱效更高的聚合物包被型核壳柱——CAPCELL CORE PC，按照相同条件进行对比分析，如图6、图7所示，内标和外标相比PC HILIC谱图，三聚氰胺保留时间同样为1.8 min，但峰形更加尖锐。

▲图6 CAPCELL CORE PC外标LC/MS分析色谱图

▲图7 CAPCELL CORE PC内标LC/MS分析色谱图

HPLC Conditions:

CAPCELL CORE PC

CAPCELL CORE PC色谱柱是将大阪曹達独立开发的磷酸胆碱基团（PC基团）键合在独特的聚合物包被型核壳填料上的一款核壳型HILIC色谱柱。

这一类型色谱柱一般使用含有机溶相比例较高的流动相，因此在常规流速下，即使使用150 mm柱长的色谱柱，整体压力也可保持在20 MPa以内。

★ 比表面积比PC HILIC低，保留相对较弱

★ 作为核壳型色谱柱，柱效更高，峰形更尖锐

★ 背压较低

★ 是分析强极性化合物的专用核壳型HILIC色谱柱

使用PC HILIC和CAPCELL CORE PC两款色谱柱对乳制品中三聚氰酸及样品进行分析，可得到良好的保留及峰形。

综上实验结果，对于三聚氰胺、三聚氰酸和双氰胺等小分子强极性化合物，不论使用哪种方法，大阪曹達均有对应的色谱柱，所得结果能满足分析要求。

【参考文献】

刘国美. LC-MS/MS法测定乳制品中三聚氰胺[J]. 山西化工. 2009(04)