2022-09-27 17:39:41 ProteinSimple
VHL-PROTAC
口服给药方案在小分子药物治疗中占主导地位,但由于PROTAC具有较大分子量和相关理化性质,设计口服给药的蛋白降解剂具有挑战性。
目前,绝大部分临床转化的具有口服给药活性降解剂是基于Cereblon(CRBN)E3连接酶,限制了PROTAC潜在疾病治疗范围。
BI公司和Dundee大学的联合研究团队利用von Hippel-Lindau(VHL)/ElonginB-ElonginC(VBC) E3连接酶复合物开发可口服的PROTAC。通过三元晶体结构来指导连接子和出口载体的设计,可产生高活性和具有合适药代动力学特性分子,进而实现口服时体内疗效。研究团队获得先导化合物分子ACBI2,在人全血样本中,相比SMARCA4,ACBI2对BAF(SWI/SNF)复合物ATP酶SMARCA2具有很强选择性,并且在所有测试的细胞系中,都显示出SMARCA2被优先降解。在体内和体外模型进行了药理学评估,在SMARCA4缺陷型癌症中选择性靶向SMARCA2,证明了ACBI2是一种可口服利用的SMARCA2降解剂。
在体外和Ex Vivo实验中,本研究利用毛细管电泳Digital Western(也称为Simple Western)技术进行蛋白质降解量效关系和时效关系曲线精准定量测定,加快蛋白降解剂研发进程。
1
具有体内SMARCA2/4降解活性PROTAC三元结构设计
采用两个化合物处理RKO细胞18h后,通过毛细管电泳Digital Western检测SMARCA2 和 SMARCA4 蛋白水平的剂量反应曲线。根据前期研究,利用VHL配体酚类出口载体,测试过可有效降解SMARCA2/4靶点双重降解剂,在此基础上,优化连接子设计,在RKO细胞内实现SMARCA2降解。在完全保留SMARCA4同时,化合物5(Compound 5)实现了SMARCA2部分降解活性(DC50=78 nM, Dmax=46%)。化合物6在体内实验中可抑制肿瘤生长。
2
ACBI2降解剂表征:Digital Western检测细胞降解水平
不同浓度和时间下,采用Digital Western检测ACBI2降解A549和NCI-H1568细胞内SMARCA2蛋白质表达水平。体外实验结果表明,ACBI2处理在两个敏感细胞系可导致SMARCA2快速完全降解。
3
采用Digital Western定量检测Ex Vivo人全血样本中SMARCA2和SMARCA4表达
采用三个健康供体的人全血样本,采用ACBI2浓度梯度处理,分离获得PBMC样本提取蛋白质,采用全自动Digital Western技术(Simple Western)检测SMARCA2和SMARCA4表达水平变化。下图蛋白表达定量结果表明,可实现SMARCA2几乎完全降解,相比SMARCA4,具有明显的选择性差异。
参考文献:
https://chemrxiv.org/engage/chemrxiv/article-details/61f43059191637263ff753a2
07-01 英斯特朗
连载 | 药物一致性评价与粒度分析(三)07-01 欧美克仪器
【仪器百科】LS-909丨干湿二合一激光粒度分析仪07-01 欧美克仪器
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