No.223｜《中国药典》3种中药的测定分析

大阪曹達｜三耀精细

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客户提供银杏叶片供试品与混合对照品（含槲皮素、山柰酚与异鼠李素），希望照20版药典银杏叶片项下分析方法，获得良好的分析结果。

我们使用CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6mm i.d.×250mm色谱柱进行分析。结果如图1、表1所示，在供试品谱图中的三种待测物的分离度分别为1.92、5.70与2.81，理论塔板数分别为10894、13870与9329，满足药典的要求。

图1银杏叶片供试品及混合对照品分析结果谱图

表1 银杏叶片供试品分析结果数据

【色谱条件】

色谱柱：CAPCELL PAK C18 AQ S5; 

             4.6mm i.d.×250mm（F92045）

流动相：甲醇 / 0.4%磷酸溶液 = 50 / 50

流   速：1.0 mL/min

柱   温：30 °C

检   测：PDA 360nm

浓   度：客户提供银杏叶片供试品与混合对照品

进样量：10 µL

客户提供了连翘样品，希望参考20版药典的分析方法，筛选出合适的色谱柱，符合药典规定，同时使主成分峰形良好。

我们使用CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6mm i.d.×250mm色谱柱进行分析。结果如图2、图3所示，在对照品溶液中连翘苷的理论塔板数16942，拖尾因子1.034，供试品溶液中主峰和杂质峰能够很好的分离。

图2  连翘苷对照品分析结果

图3  连翘苷供试品分析结果

【色谱条件】

色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGII S5; 

            4.6 mm i.d. × 250 mm（F92533）

流动相：乙腈 / 水 = 25 / 75

流   速：1 mL/min

温   度：35 °C

检   测：PDA 277 nm

浓   度：对照品溶液的制备：取连翘苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0. 2mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取本品粉末（过五号筛）约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）25分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10mL,置 25mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

进样量：10 µL

我们使用CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6mm i.d.×250mm色谱柱进行分析。结果如图4、图5所示，对照品溶液中连翘酯苷A的理论塔板数12076，拖尾因子1.021，供试品溶液中主峰和主峰前杂质峰之间的分离度为1.249，我们可以通过适当提高温度，或者降低有机相的比例来提高主峰和杂质间的分离度。

图4  对照品分析结果（35℃）

图5  供试品分析结果（35℃）

【色谱条件】

色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGII S5;

            4.6 mm i.d. × 250 mm（F92533）

流动相：乙腈 / 0.4%冰醋酸溶液 = 15 / 85

流   速：1 mL/min

温   度：35 °C

检   测：PDA 330 nm

浓   度：对照品溶液的制备：取连翘酯苷A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0. lmg的溶液，即得（临用配制）。

供试品溶液的制备：取本品粉末（过五号筛）约0. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇15ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

进样量：10 µL

我们尝试将温度升高到40℃进行测试，因为随着温度的升高，主峰和杂质峰之间的分离度增大。将温度升高到40℃时，主峰和杂质峰之间的分离度为2.041。

图6  供试品分析结果（40℃）

【色谱条件】

色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGII S5; 

            4.6 mm i.d. × 250 mm（F92533）

流动相：乙腈 / 0.4%冰醋酸溶液 = 15 / 85

流   速：1 mL/min

温   度：40 °C

检   测：PDA 330 nm

浓   度：药典方法

进样量：10 µL

我们也尝试将有机相比例降低进行测试，随着有机相浓度的降低，主峰和杂质峰之间的分离度增大。将有机相比例降到14%时，主峰和杂质峰之间的分离度为3.322，结果如图7所示。但随着有机相比例的降低，保留时间有大幅延长，在有机相仅有1%变化时，保留时间延长10min以上，因此在不同仪器分析时，可能由于泵混合体积不同而导致保留时间或分离差异，建议根据实际分析情况，微调流动相条件。

图7  供试品分析结果（14%有机相）

【色谱条件】

色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGII S5; 

            4.6 mm i.d. × 250 mm（F92533）

流动相：乙腈 / 0.4%冰醋酸溶液 = 14 / 86

流   速：1 mL/min

温   度：35 °C

检   测：PDA 330 nm

浓   度：药典方法

进样量：10 µL

本实验室参考20版药典的分析方法，使用CAPCELL PAK C18 MGII色谱柱对姜黄中的姜黄素进行分析，符合药典规定，同时主成分峰形良好。

对照品溶液中姜黄素的理论塔板数19815，拖尾因子1.102（图8黑色线条）；供试品溶液中主峰和杂质峰的分离度3.222（图8绿色线条），分析结果如图8和表2所示。

图8  姜黄素对照品和供试品分析结果

表2  姜黄素供试品中各峰积分结果表

【色谱条件】

色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGII S5;

           4.6 mm i.d. × 250 mm(F92533)

流动相：4%冰醋酸溶液 / 乙腈 = 52 / 48

流   速：1.0 mL/min

温   度：25 °C

检   测：430 nm

浓   度：对照品溶液的制备：取姜黄素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含10μg的溶液,即得。

供试品溶液的制备：取本品细粉约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10 mL，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，精密量取上清液1 mL，置20 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

进样量：5 µL