2022-07-18 09:28:27, 基泰生物 上海基泰生物科技有限公司
多肽杂质一般分为以下几种:
工艺杂质:缺失(不完全)肽,断裂肽,去酰胺多肽,氨基酸侧链的不完全脱保护所形成的副产物,氧化肽,二硫键交换的产物,非对映异构的多肽,低聚物和或聚合物
降解杂质:水解产物,断裂肽,氧化/还原肽,聚合物
残留溶剂:乙腈,DMF,哌啶
元素杂质:氟化物,重金属
基因毒杂质:亚硝胺,碳二亚胺类化合物
目前常用的分析方法是通过高效液相色谱技术(HPLC)或者超高效液相色谱技术(UHPLC),分析有关物质的含量,用离子色谱分析盐的含量,用气相色谱测定溶残,用分子排阻色谱分析聚合物;在多肽分析方法中面质谱(MS)扮演者非常重要的角色,如分子量确定、氨基酸序列的确定,主要都是通过质谱或者串联质谱分析来确认的。化学合成多肽药物属于化药,其他的一些分析方法,如紫外、红外、核磁等传统化学分析方法也是经常要用到。
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那具体我们如何分析呢?
缺失肽 | LC-MS or LC-MS/MS |
插入肽 | LC-MS or LC-MS/MS |
错给肽 | HPLC/UHPLC spiking with synthesized analogs or isplation/AAA/LC-MS or LC-MS/MS |
断裂肽 | LC-MS or LC-MS/MS |
立体异构体 | 使用合成的非对映体类似物进行加标HPLC/UHPLC或手性分析 |
天冬酰胺和天冬氨酸相关杂质 | HPLC/UHPLC/ LC-MS or LC-MS/MS |
β-丙氨酸插入 | LC-MS or LC-MS/MS |
焦谷氨酸 | HPLC or LC-MS |
二硫化物还原 | LC-MS or LC-MS/MS |
谷氨酰胺,天冬酰胺或C端的脱酰胺 | LC-MS or LC-MS/MS |
氨基官能团的乙酰化 | LC-MS or LC-MS/MS |
氧化某些残基,如芳香族或含硫侧链 | LC-MS or LC-MS/MS |
氨基酸的烷基化,酰化 | LC-MS or LC-MS/MS |
多肽杂质的控制策略主要从三方面进行,第一从合成的角度控制,合适的工艺可以减少杂质的产生或者控制杂质的含量在较低的水平;第二从分离纯化的角度,开发有效的方法去除杂质或降低杂质含量;第三就是选择合适的储存条件,减少降解杂质的产生
1)杂质研究和控制的理念
以杂质谱分析为主线,以药品安全性为核心,按照风险控制的策略,贯穿CMC各项研宄以及药理毒理和临床安全性评价,覆盖药品研制、注册和上市后监管的全生命周期管理。
2)关于合成多肽的指导原则
合成多肽药物的指导原则对合成多肽药物的制备工艺、结构确证、质量研究与质量标准和稳定性研究等方面提出了相应的技术要求,对多肽药物杂质的控制和研究具有重要的指导作用。
3)从合成的角度控制杂质形成
首先策略上要选择一个理想的合成路径。目前多肽的合成主要是分化学合成法和生物法。化学合成法中应用较多的是固相法和液相法,生物法有微生物发酵法、酶催化合成法、基因工程重组法等。这几种方法各有优缺点,王博士详细的讲解了固相合成的优缺点。
4)从分离纯化的角度去除杂质
多肽药物的纯化通常采用反相色谱法,而色谱分离的核心是选择合适的填料(固定相)。
多肽的分离和纯化:
填料(固定相):硅胶基质C18,C8,C4 聚合物
流动相:水,乙腈,甲醇
缓冲盐(离子对):TFA,AA,TEAP,NH4,Ac,(NH4)2SO4,Na2SO4,NAH2PO4,
梯度:Isocratic,Linear,Non-linear
盐形式:Acetate, Trifluroacetate,Choride, Free base
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