多肽杂质分析

    根据美国药典（USP）多肽药物指在不考虑工艺的条件下，氨基酸数目≤40属于多肽药物；当采用化学合成方法制备时，其多肽药物指氨基酸数目<100。

多肽类药物的发展越来越受到医药界的关注，多肽药物的分子量介于小分子和蛋白药物之间，显示出许多独特优势：例如相较于小分子药物，多肽药物的特异性强、活性高；而相较于蛋白药物，多肽药物的免疫原性较低、能大规模的化学合成且纯度高。由于多肽合成技术、工艺等的进步，多肽药物的研发持续升温。

不同于小分子药物，多肽药物在合成过程中易产生差向肽、缺失肽等杂质，且通常这些杂质与目标产物结构、化学性质类似，需经过复杂的提纯过程才能得到合格产品。故杂质对多肽药物的安全性、有效性具有直接影响，杂质研究也是技术审评中的重点关注内容。多肽杂质来源大致可分为三块：起始物料（有关物质、光学异构体、残留溶剂等），制备工艺（合成路线、偶联温度时间、裂解工艺等），以及储存条件（储存包装、储存温度、储存湿度等）。

    为了控制多肽杂质，仪器商也提供了相应的解决方案，我们可以参考：

THERMO赛默飞

肽类药物的制备目前主要有化学合成、基因重组和从动植物中提取三种方法。其中固相多肽合成技术的产生极大推动了多肽药物的发展，利用赛默飞特色的双三元液相色谱多组分中心切割二维在线除盐方法，可实现一次进样即可完成多组分除盐的目的，电雾式检测器（CAD）作为一种通用型检测器可辅助建立除盐方法，评价除盐效果。

在确定了二维除盐条件后，利用Orbitrap高分辨质谱的高分辨率、出色的灵敏度、高质量精度等优势性能，对已在线脱盐的未知杂质组分进行精确的鉴定。大大的提升了样品的稳定性和分析效率。

液相方法

第一维液相方法同2015版药典，各杂质分离良好，其中面积归一化含量在0.1%以上的杂质共为11个，因此本实验主要对11个杂质进行定性鉴别。第二维除盐过程采用AcclaimC18（300Å），乙腈-0.1%甲酸作为流动相进行梯度分析，辅以CAD检测，确定了二维的最佳除盐和分离条件。

质谱方法

一级全扫描：分辨率70,000;扫描范围:300-1700m/z;

二级为数据依赖型扫描模式，分辨率35,000;归一化碎裂能量（SteppedNCE）：20,23,26;动态排除10s

采用6个loop环的多中心切割方法，一次进样可完成多目标杂质的在线除盐，显著的提高鉴定的通量，同时与Orbitrap高分辨质谱联用，强强联合，提高杂质鉴定的通量和准确度，为后续的实验提供有力的数据支撑。

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