2021-08-17 16:50:08, 小迈 武汉迈特维尔生物科技有限公司
● 期刊:Environ Toxicol Pharmacol
● IF:4.86
● 发表时间:2021.05
临床研究表明,肝内胆汁淤积与肠道损伤密切相关。肠肝轴理论认为肠和肝密切相关,胆汁酸是连接肠和肝的重要介质。近期,广州中医药大学熊天琴团队与西藏藏医药大学泽仁达瓦团队共同在Environmental Toxicology and Pharmacology(环境毒理学与药理学)期刊上发表最新研究结果“ Intrahepatic cholestasis induced by α-naphthylisothiocyanate can cause gut-liver axis disorders”,迈维代谢在此次研究中提供了粪便样本中的胆汁酸检测和分析服务。
α-萘基异硫氰酸酯 (ANIT) 是一种常规的胆汁淤积建模剂,可对肝脏的小胆管造成炎症性损伤,并诱导肝内胆汁淤积损伤肝细胞 。其损伤特征类似于临床原发性胆汁性胆管炎(PBC)。PBC 可导致肠绒毛缩短、乳糜泻和肠道菌群失衡。但PBC引起肠道损伤的机制尚不清楚。
肠肝轴理论声称多种介质连接肠道和肝脏,胆汁酸是这些必需介质之一。胆汁酸通过胆汁酸受体(例如法尼醇 X 受体 (FXR) 介导的多种胆汁酸蛋白)实现胆汁酸肝脏循环,以维持正常的肝脏和肠道功能。
粪便中胆汁酸组成的变化与肠道损伤密切相关。一些胆汁酸对肠道具有细胞毒性。例如,鹅去氧胆酸 (CDCA) 可诱导肠道氧化和炎症损伤,而牛磺胆酸 (TCA) 也已被证明与肠道炎症有关。
这项研究比较了两种胆汁淤积模型:接受单次皮下注射 ANIT (75 mg/kg) 的单次注射模型,以及每隔一天注射一次 ANIT (50 mg/kg) 持续 2 周的多次皮下注射模型。使用 Transmetil(腺苷蛋氨酸 1,4-丁二磺酸盐)来缓解多次注射组的肝内胆汁淤积。实验设计如下图:
多次和单次注射ANIT致肝功能障碍
将ANIT溶解在橄榄油中,多剂量和单剂量的橄榄油对肝脏没有显著的毒性。
单次注射组肝脏出现炎症浸润和胆管增生。多次注射组炎症浸润、胆管增生更为明显(图1A)。与对照组相比,单次注射组和多次注射组血清ALT、AST、AKP和TBA水平均显著升高(图1 B-D)。
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图1.多次和单次ANIT皮下注射导致的肝功能损伤
多次和单次注射ANIT致肝纤维化
单次注射组胆管增生周围出现胶原沉积。这些结果提示,多次皮下注射ANIT引起的纤维化比单次注射ANIT引起的纤维化更严重(图2A)。
纤维化因子方面,与对照组相比,单次注射组肝纤维化标志物αSMA显著降低,多次注射组显著升高。)另一种肝纤维化标志物——细胞角蛋白19 (CK-19,在单次和多次注射组均升高(图2B)。Timp1在单次和多次注射组均显著升高,且多次注射组Timp1水平高于单次注射组。与对照组和单次注射组相比,多次注射组Mmp13和Mmp2水平显著升高(图2 C-F)。
肝脏炎症反应方面,Tgfβ1、Il-1β、Il-18 mRNA水平在单次和多次注射组均高于对照组,两组间差异无统计学意义。多次注射组TGFβ1蛋白水平明显高于对照组;然而,单次和多次注射组在这方面没有显著差异(图2 H-J)。
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图2.多次和单次皮下注射引起的肝脏炎症和纤维化损伤
多次和单次注射ANIT致肠屏障损伤
单次注射组和对照组肠道结构完整;而多次注射组小肠绒毛明显缩短。
与对照组相比,单次注射组肠道紧密连接蛋白ZO- 1、Occludin差异无统计学意义,但多次注射组小肠中ZO-1、Occludin和的表达降低(图3)。
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图3.多次和单一ANIT皮下注射导致的小肠屏障损伤和紧密连接蛋白的表达
多次和单次注射ANIT引起的肠道氧化和炎症损伤
与对照组相比,单次和多次注射组小肠中的 IL-1β、IL-10 和 IL-6的mRNA水平较高。尽管对照组和单次注射组的 IL-1β 蛋白水平没有差异,但多次注射组的水平明显更高。这表明多次注射 ANIT 会导致小肠更明显的炎症损伤(图 4 A-D)。
单次和多次注射组小肠抗氧化指标GSH和GSH/GSSG均降低,而多次注射组SOD水平降低,MDA水平升高,提示多次皮下注射ANIT可能导致肠道抗氧化能力降低和氧化剂增加(图 4 E-J)。
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图4.多次和单次ANIT皮下注射引起的小肠炎症和氧化损伤
多次和单次注射ANIT引起的粪便胆汁酸紊乱
单次注射组粪便中胆汁酸各组分均有所下降,而多次注射组部分胆汁酸成分有所增加(多次注射组中毒性胆汁酸TCA、TLCA明显升高)(图 5 A-C)。
与对照组和单次注射组相比,多次注射组的胆汁酸受体 Tgr5 增加。同时,多次注射组Fxr和Abst均降低,说明多次注射ANIT后肠道胆汁酸调节受到干扰。特别是肠道屏障的重要调节剂 Fxr 在多次注射组中显着降低(图5. D-F)。
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图5.ANIT多次和一次皮下注射后粪便胆汁酸组成的差异和胆汁酸蛋白的变化
ANIT诱导肝内胆汁淤积缓解后肠肝轴恢复
Transmetil 由腺苷蛋氨酸 1,4-丁二磺酸盐组成,其在体内代谢为 S-腺苷-L-甲硫氨酸 (SAME)。SAME对胆汁淤积有明确的治疗作用,但其对胆汁淤积中肠肝轴损伤的作用尚不清楚。作者使用 Transmetil 来缓解肝内胆汁淤积,治疗剂量的Transmetil 对肝脏没有显着毒性。
为了观察肠-肝轴的改善,作者们着重观察多次注射的效果。用 Transmetil 治疗后,胆管增生(图 6A)和 ALT、AST、AKP、TBA(图 6B-E)和 TGF-β1(图 6F)的水平降低。胆汁酸受体FXR上调(图 6 H)。Transmetil治疗后回肠绒毛缩短得到改善(图6I),GSH、GSH/GSSG增加,GSSG降低(图6J-L),小肠IL-1β降低(图6M),回肠FXR增加(图 6 N)。
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图6.Transmetil治疗后,ANIT诱导的肠肝轴紊乱恢复
多次皮下注射ANIT引起的肝内胆汁淤积会导致更严重的肝纤维化、肠屏障损伤、肠氧化、炎症损伤。其机制可能与粪便中胆汁酸组成的改变及回肠FXR的改变有关。胆汁酸与细菌的相互作用,可能进一步阐明胆汁淤积致肠道损伤的机制。
本文涉及到的关键代谢通路是胆汁酸代谢,迈维代谢推出的50种胆汁酸绝对定量产品,包含游离胆汁酸、结合胆汁酸、初级胆汁酸、次级胆汁酸等各类型胆汁酸,内标+外标双重验证的绝对定量方法,覆盖广、定量准,适合各类胆汁酸相关疾病(特别是肝脏疾病)以及肠道微生物与宿主互作研究。
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